Objective of the study was to develop enzyme-immunoassay test-kit for the detection of Bacillus anthracis spores. Materials and methods. Microbial cultures from the State Collection of Microorganisms at the premises of Affiliated Branch of the «48th Central Research Institute» of the Ministry of Defense of the Russian Federation and BALB/c mice were used in the research. Hybridization of B-lymphocytes with SP2/0-Ag14 myeloma cells was performed according to G. Kohler and C. Milstein procedure in De St. Fazekas and P. Scheidegger modification. Hybridomas were cultured in the peritoneal cavity of BALB/c mice. Ascitic fluids were isolated from mice, precipitated with ammonium sulfate and purified by means of ion-exchange chromatography for preparation of monoclonal antibodies. Specific activity of hybridoma’s supernatants, ascitic fluids, purified monoclonal antibodies was studied by «sandwich» ELISA. Specific components of test-kit were lyophilized in suitable cryoprotective medium. Results and conclusions.We have obtained new hybrid cell lines producing specific monoclonal antibodies against Bacillus anthracisspore antigens and ascitic fluids from which immunoglobulins were isolated. Optimum combinations of monoclonal antibodies as a sensitizer and a component of immunoperoxidase conjugates have been selected. Monoclonal antibodies 272E10G1-272F7A10 provide the highest sensitivity of ELISA for the detection of anthrax microbe spore antigens. Our enzyme-immunoassay test allows for identification of Bacillus anthracis spores in concentrations up to 5,0·105 spores per milliliter. No cross reaction with closely related saprophytes and other heterologous microorganisms in concentrations of 1,0·108 CFU per milliliter is observed.

БИОТЕХНОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯ 67 2017, issue 2 бруцеллез -особо опасная зоонозная инфекция, характеризующаяся неопределенной продолжительностью инкубационного периода, неспецифической клинической симптоматикой с множественным поражением органов и систем организма человека, часто приводящая к инвалидизации. человек заражается от животных главным образом контактным или контактно-бытовым путем через кожу и слизистые оболочки полости рта, носа, глаз. алиментарный способ заражения наблюдается в основном при употреблении в пищу непастеризованных молочных продуктов, а также воды [1, 2, 6]. из 10 видов бруцелл заболевания людей преимущественно вызывают В. melitensis, В. abortus и B. suis, реже -B. canis. в нашей стране причиной более чем 95-97 % случаев бруцеллеза людей является В. melitensis. в россии ежегодно фиксируется от 300 до 500 Пробл. особо опасных инф. 2017; 2:67-71. удк 616.98:579.841.93 Г.В.куклина, Г.Д.елагин, о.о.фоменков, Д.В.Печенкин, а.В.еремкин, а.а.кытманов Получение гиБридоМ-Продуцентов МоноКлональных антител К антигенаМ возБудителя Бруцеллеза Филиал ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации, Киров, Российская Федерация цель работы. получение гибридом-продуцентов моноклональных антител к антигенам возбудителя бруцеллеза. материалы и методы. в работе использовали микробные культуры из государственной коллекции микроорганизмов филиала Фгбу «48 цнии» минобороны россии (киров); мыши линии BALB/с. гибридизацию проводили по методике G.Kohler и C.Milstein в модификации De St.Fazekas и D.Scheidegger. исследование специфической активности иммунных сывороток, супернатантов гибридом, асцитных жидкостей, препаратов моноклональных антител проводили методом непрямого иммуноферментного анализа. результаты и выводы. получены и охарактеризованы гибридомы-продуценты моноклональных антител к специфическим антигенам возбудителя бруцеллеза. полученные гибридомы являются активными и стабильными антителопродуцентами при многократном пассировании in vitro и in vivo. получены асцитные жидкости и приготовлены препараты бруцеллезных моноклональных антител. проведен обоснованный выбор антител, обеспечивающих наибольшую чувствительность иммуноферментного анализа. установлено, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами 232B6H7, 232G12F7, 233B2C5, в сочетании с бруцеллезными кроличьими иммуноглобулинами позволяют выявлять микробные клетки типовых штаммов различных видов бруцелл в концентрации от 0,25·10 6 до 1,0·10 6 м.к.·см -3 и не взаимодействуют с культурами гетерологичных микроорганизмов в концентрации 1,0·10 8 м.к.•см -3 . гибридомыпродуценты и препараты специфических бруцеллезных моноклональных антител планируется использовать для разработки и производства средств иммунодетекции.Ключевые слова: бруцеллез, моноклональные антитела, иммуноферментный анализ.Objective of study is to prepare hybridomas-producers of monoclonal antibodies to brucellosis agent antigens. Materials and methods. B. abortus, B. melitensis, B. suis strains from the State collection of microor...

Carried out have been two experimental studies on hybridization of mouse myeloma cells and lymphocytes of BALB/c mice immunized with inactivated microbe Francisella tularensis cultures. As a result obtained have been hybridomas-producers of monoclonal antibodies (MAb) specific to the antigens of tularemia agent. Evaluated have been the prospects of its application for the detection of the agent under discussion using enzyme-linked immunoassay. Established is the fact that monoclonal antibodies produced by 31G1F10, 32E5D3, 35B11C8, 36C2F11 hybridomas make it possible to identify microbe cells of various tularemia agent strains when concentrated up to 0.5•10 6 mc/sm 3 , and do not interact with cultures of heterologous microorganisms when concentrated to 1.0•10 8 mc/sm 3 , which testifies to their specificity. These MAb are planned to be used for the construction of immune-enzyme and immune-chromatographic test-systems designed for tularemia agent detection.

разработка иММунохроМатографической Моноклональной тест-систеМы для выявления Yersinia pseudotuberculosis серогруппы I ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны РФ, Киров, Российская Федерация Цель. Разработать иммунохроматографическую моноклональную тест-систему для выявления возбудителя псевдотуберкулеза серогруппы I. Материалы и методы. В качестве специфических компонентов для разработки иммунохроматографической тест-системы были использованы мышиные моноклональные антитела гибридных клеточных линий, полученные на липолисахаридный антиген наружной мембраны «холодового» варианта псевдотуберкулезного микроба I серотипа (YP-101Н2В4, YP-105С5А10); кроличьи антивидовые антитела против иммуноглобулинов мыши. Для получения конъюгата коллоидного золота с антителами (КЗ-АТ) были использованы частицы диаметром (30±2) нм. Для конъюгирования с коллоидным золотом использовали концентрацию антител, на 10-15 % превышающую точку выхода D580 на плато. Для изготовления иммунохроматографической тестсистемы применяли комплект мембран фирмы MDI Easypack («Advanced Microdevise», Индия). Готовый конъюгат наносили на мембрану методом пропитывания. Антитела в аналитическую и контрольную мембраны в выбранной концентрации наносили с помощью диспенсора. Подложку с нанесенным конъюгатом и готовые рабочие мембраны сушили в вакуумном сухожаровом шкафу. Собранные иммунохроматографические тест-системы нарезали по 4,5 мм и тестировали на специфичность и чувствительность. Результаты и выводы. Разработана иммунохроматографическая тест-система, в которой использовали моноклональные антитела гибридной клеточной линии YP-105C5A10 в конъюгате с коллоидным золотом и моноклональные антитела гибридной клеточной линии YP-101H2B4 в тестовой линии. Тест-система обеспечивает выявление штаммов Y. рseudotuberculosis серогруппы I в концентрации от 500 тыс. м.к.•см-3 (при тестировании 8 штаммов из 11 исследованных) до 4 млн м.к.•см-3 и не выявляет при исследовании близкородственные иерсинии и гетерологичные микроорганизмы в концентрации 100 млн м.к.•см-3. Ключевые слова: возбудитель псевдотуберкулеза серогруппы I, моноклональные антитела, иммунохроматографическая тест-система.

Aim. Obtaining hybridomas, stable producing specific monoclonal antibodies against Burkholderia mallei and Burkholderia pseudomallei antigens. Materials and methods. The microbial cultures from State Collection of Microorganisms from the Branch of 48 CSRI of the Defense Ministry of Russian Federation (Kirov) and BALB/c mouse were used in research. Hybridization of B lymphocytes with SP2/0-Ag14 myeloma cells was performed by G.Kohler and C.Milstein procedure in De St. Fazekas and D.Scheidegger modification. The specific activity of immune sera, hybridoma supernatants, ascites and evaluating the diagnostic capabilities of monoclonal antibodies was studied by ELISA. Results. Hybridomas, producing monoclonal antibodies against causative agents of glanders and melioidosis antigens, were obtained and characterized. Obtained hybridomas are active and stable antibody producers after repeated in vitro and in vivo passaging. Immunoglobulins from obtained ascites were isolated. Antibodies provided the greatest sensitivity and specificity were selected. Conclusion. Monoclonal antibodies, producing by obtained hybridomas may be used for creating of immune biological tests.