Melatonina, tirosol e hidroxitirosol son sustancias bioactivas cuya presencia se ha descrito en el vino en baja concentración, lo que representa un reto para su análisis. El presente trabajo plantea la puesta a punto de un método para su determinación, mediante cromatografía líquida de alta eficacia acoplada a detección por espectrofotometría de diodos y espectrometría de masas (HPLC-DAD-MS) y su aplicación posterior para su análisis en muestras de diversos tipos de vinos.