Introducción. L. gasseri es una bacteria láctica del tracto digestivo, que tiene características probióticas importantes para el control de organismos patógenos, y S. aureus es una cepa patógena importante en la industria alimentaria, debido a los problemas sanitarios que produce en varios países. Objetivo. Se buscó evaluar las características probióticas de L. gasseri sobre S. aureus en condiciones in vitro. Materiales y métodos. Se evaluó la susceptibilidad de ambas cepas a diferentes antibióticos; el efecto de inhibición de L. gasseri y su sobrenadante sobre S. aureus; crecimiento de la cepa láctica a diferentes pH, temperaturas, sales biliares y bilis bovina; también se estableció la cinética de fermentación y en ella se determinó conteo de microorganismos viables en placa, pH, consumo de azúcar, consumo de proteína y porcentaje de ácido láctico; y mediante HPLC-DAD se determinó péptidos y ácido láctico, y en el caso de aminoácidos en el sobrenadante se determinó mediante HPLC-PDA. Resultados. Se encontró resistencia de ambas cepas a los antibióticos penicilina, dicloxacilina, cifoxitin y cefalexin. La cepa láctica y el sobrenadante inhibieron el crecimiento de S. aureus. El crecimiento fue adecuado para las diferentes variables con valores entre 1.5 x 108 a 3.0 x 1014 UFC/150 µl. Se observó la fase exponencial a las 9 horas con valores de 33.33 Ln UFC/150 µl. Finalmente se identificaron mediante HPLC-DAD el péptido VAL-TIR-VAL, 11.70 g/l de  ácido láctico, y el aminoácido tirosina. Conclusión. Los resultados demuestran que Lactobacillus gasseri tiene características probióticas sobre S. aureus en condiciones in vitro.