Objetivos: descrever o conhecimento de médicos e enfermeiros pré-natalistas sobre a toxoplasmose.Método: estudo transversal, analítico, realizado entre outubro de 2018 e fevereiro de 2019, com 89 profissionais de 43 Unidades Básicas de Saúde de Aracaju, Sergipe, Brasil, por meio de questionário autoaplicado. Foram calculadas as frequências absolutas, relativas e os odds ratios. Utilizaram-se os testes Exato de Fischer e Qui-quadrado para análise dos dados.Resultados: os médicos e enfermeiros atuantes no pré-natal apresentaram pouco conhecimento sobre toxoplasmose relacionado às formas infectantes (p=1,000), vias de transmissão (p=1,000), grupo vulnerável (p=0,290), período de transmissão (p=1,000), maior risco para sequelas no recémnascido (p=0,828), quando realizar exames (p=0,015), indicação e interpretação do teste de avidez (p=0,355).Conclusão: este estudo identificou lacunas de conhecimento e poderá contribuir para planejamento de educação continuada para profissionais pré-natalistas, a fim de prevenir a toxoplasmose congênita.