AbstractAim. The purpose of this study is to reveal the determination of the structure of the main metabolite of morpholinium 2-(4-(2-methoxyphenyl)-5-(pyridin-4-yl)-4H-1,2,4-triazole-3-yl)thio)acetate (an active pharmaceutical ingredient – API) by way of chromatography through mass spectrometry detection, utilizing the liquid chromatography system Agilent 1260 Infinity and mass spectrometry detector (single quadrupole detector Agilent 6120). In the work, the graph of the change in the area of the peak of the metabolite from time after the introduction of the API solution was constructed. Moreover, the charges on the atoms of 2-((4-(2-methoxyphenyl)-5-(pyridin-4-yl)-4H-1,2,4-triazol-3-yl)thio) acetate were calculated and the structure of the methyl derivative was proposed. We saw that the methylation of the active substance during metabolism formed a 5-((carboxymethyl)thio)-4-(2-methoxyphenyl)-1-methyl-3-(pyridin-4-yl)-4H-1,2,4-triazol-1-um cation through N-methyltransferase.

The aim is to study the features of the formation of neutrophil extracellular traps in the blood and gut-associated lymphoid tissue with salmonella-induced inflammation against the background of the administration of vancomycin and B. fragilis, and to determine the concentration of short-chain fatty acids in the luminal microflora of rats by means of chromatography-mass spectrometry.Methods. Studies were carried out on quantitative counting of Sytox + -neutrophiles and NETs in scrapings of the mucous membrane of the ileum of the intestine and in blood by the method of immunofluorescence microscopy, and also by determination of the concentration of SCFA in the luminal microflora of rats by chromatography-mass spectrometry.Results. The introduction of vancomycin contributed to an increase in the number of Sytox + -cells in scrapings of the intestinal mucosa and in the blood by 55 % and 2.5 times (group II). With the combined administration of vancomycin and S. enteritidis (III group), S. typhimurium (IV group), the mean Sytox + -cell counts in mucosal scrapings increased by 30 % and 2.4 times, and in the blood by 30 % (group IV ), there was also a decrease in the number of NETs by 40 % (group IV). The introduction of B. fragilis against the ґbackground of pretreatment with vancomycin and infection with salmonella showed a decrease of Sytox + -cells in the scrapings of the intestinal mucosa by 43 % and 53 %, and in the blood by 46 % and 58 % (V and VI groups), and the number of NETs in scrapings from the intestinal mucosa and in the blood significantly increased by 43 % and 40 % (V group), and by 2.3 and 2.0 times (group VI). When infecting the rats with S. typhimurium against the background of pretreatment with vancomycin and the introduction of B. fragilis, the concentration of acetate in the samples increased by 2 times; propionate -6 times and butyrate -3 times.Conclusions. The introduction of B. fragilis in the infection of S. enteritidis and S. typhimurium against the background of vancomycin pretreatment leads to decrease in the number of Sytox + -cells in scrapings from the intestinal mucosa and in the blood, but induces the generation of NETs, and also causes an increase in the concentration of SCFA in the luminal microflora of rats, which helps to reduce salmonella-induced inflammation and restore the integrity of the intestinal epithelium.Визначення нейтрофільних позаклітинних пасток і концентрації коротколанцюгових жирних кислот при сальмонела-індукованому запаленні кишечника на тлі введення ванкоміцину та Bacteroides fragilis Ю. В. Букіна, Б. О. Варинський, О. В. Войтович, Г. Д. Коваль, А. Г. Каплаушенко, О. М. Камишний Мета роботи -вивчити особливості формування нейтрофільних позаклітинних пасток у крові та кишково-асо-ційованій лімфоїдній тканині при сальмонела-індукованому запаленні на тлі введення ванкоміцину і B. fragilis, а також визначити концентрацію коротколанцюгових жирних кислот у просвітній мікрофлорі щурів за допомогою хромато-мас-спектрометрії. Матеріали та методи. Здійснили дослідження з...

Purpose. A development and validation of new sensitive, high efficient and selective HPLC determination method of intermediates technological contaminations in bulk drug of morpholin-4-ium 2-((4-(2-methoxyphenyl)-5-(pyridine-4-yl)-4H-1,2,4-triazole-3-yl) thio)acetate (active pharmaceutical ingredient -API).Materials and methods. LC System was Agilent 1260 Infinity (degasser, binary pump, autosampler, column thermostat, diode array detector) Open LAB CDS Software. Column was Zorbax SB-C18; 30 mm × 4.6 mm; 1.8 µm. Injection volume was 5 µL. Isocratic mode. The mobile phase was water/acetonitrile (84:16) with 0.1 % methanoic acid. Standard samples were morpholinium 2-((4-(2-methoxyphenyl)-5-(pyridin-4-yl)-4H-1,2,4-triazol-3-yl)thio)acetate, pyridine-4-carbohydrazide, 2-isonicotinoyl-N-(2-methoxyphenyl)hydrazine-1-carbothioamide, 4-(2-methoxyphenyl)-5-(pyridin-4-yl)-2,4-dihydro-3H-1,2,4-triazole-3-thione. Results.A new criterion for choosing chromatographic separation condition was proposed. It is absolute value of retention factors differences (|Δk|). Six different curves which show dependence of absolute value of retention factors differences (|Δk|) for each compound from the acetonitrile in mobile phase was built at registration of the signal on diode-array detector. A chromatographic separation optimal condition of impurities and API in drug bulk was found with satisfied resolution. UV spectra of API and impurities were determined. Method of the quantitative determination of the impurities was elaborated. Total sample preparation uncertainty was predicted. Method was validated according to European and Ukrainian Pharmacopeia. It was applied for real bulk drug samples. Conclusions.Chromatography separation of impurities and API was done. A method was complied with linearity criteria, specificity, precision and accuracy. The results of impurity determination in bulk drug indicated, that method can be used for the quality control of bulk drug.Розробка та валідація ВЕРХ-ДМД методики визначення домішок напівпродуктів морфоліній 2-((4-(2-метоксифеніл)-5-(піридин-4-іл)-4H-1,2,4-тріазол-3-іл)тіо)ацетату в субстанціїМета роботи -розробка та валідація нового чутливого й селективного ВЕРХ-способу визначення проміжних технологіч-них домішок у субстанції з морфоліній 2-((4-(2-метоксифеніл)-5-(піридин-4-іл)-4H-1,2,4-тріазол-3-іл)тіо)ацетату (активний фармацевтичний інґредієнт -AФI).Матеріали та методи. LC Система була Agilent 1260 Infinity (дегазатор, бінарний насос, автосамплер, термостат колонки, діодно-матричний детектор), програмне забезпечення Open LAB CDS. Колонка Zorbax SB-С18; 30 мм×4,6 мм; 1,8 мкм. Обсяг інжекції становив 5 мкл. Ізократичний режим. Рухома фаза вода/ацетонітрил (84:16) з 0,1 % метанової кислоти. Стандартні зразки -морфоліній 2-((4-(2-метоксифеніл)-5-(піридин-4-іл)-4H-1,2,4-тріазол-3-іл)тіо)ацетат, піридин-4-карбогідразід, 2-ізоніко-тиноїл-N-(2-метоксифеніл)-гідразин-1-карботіоамід, 4-(2-метоксифеніл)-5-(піридин-4-іл)-2,4-дигідро-3H-1,2,4-триазол-3-тіон.Результати. Запропонований новий критерій для виб...

Derivatives of 1,2,4-triazole are actively researched by scientists and synthetic pharmacologists. The last studies have shown that potassium 2-((4-amino-5-(morpholinomethyl)-4H-1,2,4-triazol-3-yl)thio)acetate with low toxicity series exhibits antioxidant and hepatoprotective properties. Therefore, the purpose of this work was to develop a method for determining the API in the potassium 2-((4-amino-5-(morpholinomethyl)-4H-1,2,4-triazol-3-yl)thio)acetate substance using the method of high-performance liquid chromatography with diode array detection (HPLC-DAD). As a result of this work, it is shown that the developed method is specific and meets the requirements of linearity, accuracy and precision. The results of determining the contents of the API in real samples indicate that the method can be proposed to control the quality of the potassium 2-((4-amino-5-(morpholinomethyl)-4H-1,2,4-triazol-3-yl)thio)acetate substance.

Похідні 1,2,4-триазолу є потенційними лікарськими речовинами з різноманітною біологічною активністю. Контроль стадій отримання таких сполук на дослідному і виробничому етапі є важливим завданням сучасної фармацевтичної науки. Найбільш універсальним і селективним методом, що дозволяє підтверджувати структуру як основних речовин, так і домішок та визначати кількісний вміст аналітів, є ВЕРХ/ ДМД-МС. Метою дослідження є вивчення залежності параметрів утримування ряду 1,2,4-триазол-3ілтіоацетатних кислот та їх солей, що є кінцевими продуктами у синтезі зареєстрованих і потенційних лікарських речовин за 8 схемами синтезу, від вмісту ацетонітрилу в рухомій фазі за умов ВЕРХ/ ДМД-МС-визначення. Встановлено залежність коефіцієнта ємності k від вмісту ацетонітрилу для ряду 1,2,4-триазол-3-ілтіоацетатних кислот та їх солей. Показані можливості вибору умов хроматографічного визначення цих сполук як окремо, так і в сумішах. Встановлено, що для досліджуваних 1,2,4-триазол-3-ілтіоацетатних кислот до 65% вмісту ацетонітрилу в елюенті спостерігається обернено-фазовий механізм утримування, а потім іонообмінний механізм взаємодії з силанольними групами. Показано експоненційний характер взаємозв'язку між logD та коефіцієнтами ємності досліджуваних сполук при 15% вмісті ацетонітрилу в складі рухомої фази. Встановлено, що взаємозв'язок між logD та десятковими логарифмами коефіцієнтів ємності досліджуваних сполук при 15% вмісті ацетонітрилу в складі рухомої фази носить лінійний характер.