Actualmente a nivel nacional e internacional Dactylopius opuntiae Cockerell (Hemiptera: Dactylopiidae) se ha convertido en el principal enemigo fitosanitario del nopal (Opuntia spp.). Para su control existen pocas opciones, pero se ha privilegiado el empleo de agroquímicos, con los efectos colaterales que su uso implica. Considerando que la utilización de hongos entomopatógenos representan una alternativa viable en el manejo integrado de este fitófago, en esta investigación se evaluó la patogenicidad y virulencia de tres especies y dos aislamientos: Beauveria bassiana (GHA, Bb1), Metarhizium anisopliae (Ma129, Ma130) y Lecanicillium lecanii (974, 2009) sobre la mortalidad de ninfas de segundo instar de D. opuntiae. Los resultados mostraron que todos los aislamientos evaluados presentan diferente grado de patogenicidad; sin embargo, M. anisopliae y L. lecanii resultaron más efectivos. El aislamiento Ma 130, perteneciente a M. anisopliae presentó la mayor virulencia determinada en función de la CL50 con un valor de 6.63 x 107 conidios mL-1, bajo condiciones controladas. Por lo anterior, este aislamiento podría ser considerado en una estrategia de control de D. opuntiae.