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Mutations and alterations in the expression of VEGFA, KRAS, and NFE2L2 oncogenes play a key role in cancer initiation and progression. These genes are enrolled not only in cell proliferation control, but also in angiogenesis, drug resistance, metastasis, and survival of tumor cells. MicroRNAs (miRNAs) are small, non-coding regulatory RNA molecules that can regulate post-transcriptional expression of multiple target genes. We aimed to investigate if miRNAs hsa-miR-17-5p, hsa-miR-140-5p, and hsa-miR-874-3p could interfere in VEGFA, KRAS, and NFE2L2 expression in cell lines derived from head and neck cancer (HNC). FADU (pharyngeal cancer) and HN13 (oral cavity cancer) cell lines were transfected with miR-17-5p, miR-140-5p, and miR-874-3p microRNA mimics. RNA and protein expression analyses revealed that miR-17-5p, miR-140-5p and miR-874-3p overexpression led to a downregulation of VEGFA, KRAS, and NFE2L2 gene expression in both cell lines analyzed. Taken together, our results provide evidence for the establishment of new biomarkers in the diagnosis and treatment of HNC.

Introdução: O câncer é uma doença multifatorial influenciada por fatores ambientais e genéticos. A progressão tumoral, os mecanismos de plasticidade celular e o desenvolvimento de metástase são coordenados por uma rede complexa de alterações genômicas e epigenômicas, aspectos que representam um grande desafio para o diagnóstico e tratamento da doença. O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) é o principal responsável pela formação de novos vasos sanguíneos a partir de vasos pré-existentes, processo denominado angiogênese. O processo angiogênico desempenha um papel essencial no desenvolvimento e crescimento do tumor.  MicroRNAs (miRNAs) são pequenas moléculas de RNA reguladoras não codificantes que podem regular a expressão pós-transcricional de múltiplos genes alvo. Objetivo:  Investigar se os miRNAs hsa-miR-140-5p e hsa-miR-874-3p podem interferir na expressão do oncogene VEGFA em linhagens de CCP. Metodologia: As linhas celulares FADU (câncer de faringe) e HN13 (câncer de cavidade oral) foram cultivadas até atingirem a confluência necessária para a transfecção com os mimetizadores dos miRNAs miR-140-5p e miR-874-3p. Foram realizados três experimentos independentes, com posterior extração de RNA sendo submetido ao PCR em tempo real para análise da expressão gênica e de miRNAs. A Técnica de Western Blotting foi utilizada para a avaliar a expressão proteica.  Resultados: Após a transfecção, os níveis de expressão do miR-140- 5p (FADU - RQ= 15.620; p= 0.0121 e HN13 - RQ= 3.322; p= 3.322) e miR-874-3p (FADU - RQ= 2.871; p= 0.0313 e HN13 - RQ= 13.265, p= 0.0642) estavam aumentados, em relação ao controle negativo (RQ=1,00), confirmando a eficiência da transfecção. A expressão gênica do VEGFA foi diminuída nas células transfectadas com miR-140-5p (FADU - RQ= 0.5223; p= 0.0015 e HN13 – RQ= 0.4552; p= 0.0019) e miR-874-3p (FADU – RQ= 0.4906; p= <0.0001 e HN13 – RQ= 0.7197; p= 0.2343). Conclusão: A superexpressão do miR-140-5p e miR-874-3p levou a uma regulação negativa da expressão gênica e proteica do VEGFA em ambas as linhagens celulares analisadas.