ResumoA cana-de-açúcar é uma cultura muito plantada devido a sua grande importância econômica, provenientes de seus produtos, etanol e açúcar. O Brasil é o maior produtor e exportador mundial de açúcar, sendo assim a cultura está freqüentemente inserida em programas de melhoramento genético. A transformação genética é estratégia para obtenção de cultivares resistentes e produtivas. Para obtenção de plantas transgênicas são necessários protocolos definidos e otimizados de regeneração in vitro. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência de diferentes concentrações de 2,4-D (ácido 2,4 diclorofenoxiacético) para obtenção de calos embriogênicos na cultivar RB966928 e no clone RB986419. Folhas imaturas, de plantas com 10 meses de idade, foram utilizadas como fonte de explantes. Cilindros foliares de 8 x 150 mm, segmentados em 4 mm, foram inoculados em meio de cultura MS com cinco concentrações de 2,4-D (1, 3, 9, 16 e 27 µM).Um segundo experimento foi realizado com as concentrações de 3, 9 e 16 µM de 2,4-D. Para os dois experimentos, a desdiferenciação do material ocorreu no escuro. Os calos foram transferidos após 45 dias de subcultivo para novo meio de cultura, com as mesmas concentrações de origem para sua multiplicação. A cultivar RB966928 teve respostas de embriogênese somática de 30 e 41% utilizando 16 µM de 2,4-D para o primeiro e segundo experimentos, respectivamente. O clone RB986419 apresentou, respectivamente, 26 e 80% de formação de calos embriogênicos, utilizando-se 9 µM de 2,4-D no primeiro e segundo experimento. Os calos formados foram transferidos para meio MS sem regulador de crescimento vegetal. As plântulas formadas foram aclimatizadas e colocadas em casa de vegetação. As melhores concentrações de 2,4-D para a formação de calos embriogênicos foram 16 µM para a cv. RB966928 e 9 µM para o clone RB986419. Palavras-chave: Calos embriogênicos, 2,4-D, cultivo in vitro AbstractThe sugar cane is a crop widely planted because of the economic importance of its products, sugar and ethanol. Brazil is the largest producer and exporter of sugar, so the crop is often inserted in breeding programs. Genetic transformation strategy is used to obtain resistant and productive cultivars. Defined and optimized in vitro regeneration protocols are required to obtain transgenic plants. The aim of this study was to evaluate the influence of different concentrations of 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) to obtain embryogenic callus on cultivars RB966928 and RB986419 clone. Immature leaves from