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ResumenCon el propósito de evaluar una técnica de avidina-peroxidasa biotinilada, se utilizó el conjugado antirrábico producido en el INS para la detección del virus de rabia en cortes gruesos de cerebros de ratón tratados con varios tipos de fijadores y con varias diluciones del conjugado. Los animales infectados experimentalmente fueron perfundidos vía intracardiaca con varios fijadores; los cerebros se recuperaron, se les hicieron cortes gruesos de 60 pm y se sometieron a la inmunodetección. Se encontró que en las diluciones normalmente usadas en fluorescencia se presentó un fuerte marcaje inespecífico sin mejorar la detección. En este trabajo, se presenta un protocolo fácil y rápido que pudiera ser útil para la obse~ación de muestras sospechosas. The use of an immunoperoxydase technique for the detection of rabies virus in thick brain slicesWith the intention of evaluating an avidine-peroxidase biotinilated technique, the antirabies' sera, produced in the INS, was used for the detection of the rabies' virus in mouse brain tissue, treated with various types of fixers and various antisera dilutions. The experimentally infected animals were killed by intra-aortic perfusion with various fixers; their brains were recovered, cut into 60 pm slices and submitted to immunodetection. It was found that the normally used fluorescent dilutions presented strong non-specific marking without improving detection. In this work a protocol which is fast and easy is presented, which could be useful for the observation of suspect samples.El diagnóstico histopatológico de la rabia se ha bral y células de Purkinje en el cerebelo (3). En basado por años en la detección de inclusiones 10s e~pecímenes en los que no es posible identípicas en el citoplasma de las neuronas infecta-tificar 10s corpúsculos de Negri, se hacen pruedas (cuerpos de Negri), que también pueden ser bas adicionales como la inoculación en ratón o evidenciadas en las preparaciones para la prueba de inmunofluorescencia, que son inmunofluorescencia (2). En los casos en los confirmatorias de la presencia del virus (3). que se evidencian las inclusiones, se encuen-La reacción con sueros antirrábicos acoplados a tran preferencialmente en las neuronas del fluoresceína se usa normalmente para hacer el hipocampo (cuerno de Ammon), corteza cere-diagnóstico en especímenes sospechosos y se

ResumenCon el objetivo de establecer una técnica de inmunocitoquimica por avidina-peroxidasa biotinilada para la detección de células infectadas in vitro por el virus rábico, se usaron cultivos de ganglio de la raíz dorsal de ratón. En este trabajo se presentan los resultados del proceso de estandarización de la inmunoperoxidasa, en la que también se usa el conjugado antirrábico producido en el lnstituto Nacional de Salud. Las diluciones de anticuerpo, que normalmente se usan en la inmunofluorescencia, muestran un excesivo ruido de fondo en la inmunoperoxidasa. Se discuten las posibles razones de este artefacto y se presenta un protocolo para la detección por inmunoperoxidasa de células de ganglio sensorial infectadas in vitro por virus de rabia. SummaryAn immunoperoxidase ABC technique was developed to detect rabies virus in dorsal root ganglion cells. This paper presents the standarization of the immunoperoxidase ABC technique which uses the antirabies conjugate produced by the Colombian lnstituto Nacional de Salud. Antibody dilution normally used in the fluorescence routine technique shows an excesive background in the ABC assay. We discuss the possible reasons and presenta protocol that minimizes the high background in the ABC immunoassay.El sistema de inmunodetección que utiliza un anticuerpo y una enzima biotinilados unidos por medio de una molécula de avidina, fue desarrollado en la década de los 80 por Hsu (1, 2) y, desde entonces, ha demostrado ser una metodologia fácil, reproducible y económica para la inmunocitoquímica. El sistema implica una fuerte amplificación de la señal del antigeno buscado por el uso de los anticuerpos primario y secundario y por la incubación con el complejo enzima-avidina (3-5), de tal manera que, cantidades de antigeno indetectables por otros medios, se hacen evidentes. por inmunofluorescencia directa, usando un anticuerpo primario acoplado a isotiocianato de fluoresceina (6-8). Con esta técnica se obtienen resultados reproducibles, aunque adolece de varios problemas, como el ser una preparación cuya vida útil e s muy corta, utilizar una concentración elevada de anticuerpo primario y requerir de un microscopio de fluorescencia, costoso y no siempre disponible.El Laboratorio de Neurobiologia del lnstituto Nacional de Salud está trabajando en un modelo M vitro para estudiar la interacción entre el virus rábico v las células del sistema nervioso. Con el La inmunodetección de las células infectadas in fin de obviar las limitantes señaladas en el vitro por el virus rábico se hace, generalmente, trabajo con fluorescencia, se presentó la