Introducción.La mucopolisacaridosis IV A (Morquio A) es una enfermedad de depósito lisosómico causada por la deficiencia en la actividad de la enzima N-acetil-galactosamina-6-sulfato-sulfatasa que produce la acumulación intralisosómica de queratán y condroitín-6-sulfato. Hasta el momento, su manejo es paliativo, por lo que las investigaciones se han enfocado en establecer una terapia que pueda aplicarse tempranamente y garantice la expresión estable de la enzima. En este sentido, la terapia génica se presenta como una de las potenciales alternativas terapéuticas para corregir el defecto genético en la mucopolisacaridosis IV A. Objetivo. Construir vectores de expresión derivados de virus adenoasociados para corregir in vitro la deficiencia enzimática en la mucopolisacaridosis IV A. Materiales y métodos. Se produjeron vectores derivados de virus adenoasociados que portaban el gen humano de la enzima N-acetil-galactosamina-6-sulfato-sulfatasa dirigido por el promotor temprano del citomegalovirus humano, empleando un sistema libre de adenovirus. Se transfectaron células HEK293 y fibroblastos humanos Morquio A con los virus recombinantes, y se determinó la actividad enzimática en el lisado celular a las 24 y 48 horas después de la transfección. Resultados. Se obtuvieron virus adenoasociados recombinantes, libres de adenovirus, con títulos hasta de 2,08 x 10 10 cápsides/ml. Tanto en células HEK293 como en fibroblastos Morquio A transfectados, se obtuvieron actividades enzimáticas hasta de 3,05 nmoles/mg por hora, 48 horas después de la transfección. Conclusión. Los virus recombinantes producidos expresaron in vitro la enzima GALNS en las células transfectadas. Estos resultados constituyen el paso inicial para el desarrollo de una terapia génica para la enfermedad de Morquio A empleando vectores derivados de virus adenoasociados.
El objetivo de esta investigación fue la caracterización parcial de proteínas de la fracción acuosa y micelio del cultivo de una cepa de Cladosporium sp, aislada de la casa de un paciente reactivo a las conidias de este hongo, ubicada en la zona nor-oriental de la ciudad de Cali. Se determinó la concentración de proteínas con el método de Lowry, el patrón electroforético en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio (SDS) y la actividad de las enzimas proteasas y fosfatasa ácida y alcalina. En el micelio se encontró un contenido proteico de 5.88 ug/mL, bandas de electrofóresis entre 11 y 74 kDa, actividad proteolítica en un rango de pH entre 6.0 y 8.0, actividad de fosfatasa negativa en medio ácido y alcalino. Las pruebas realizadas con el extracto acuoso fueron negativas. Investigaciones realizadas en otras partes del mundo han demostrado que existe variación en la cantidad y actividad de las proteínas de estos hongos, lo que hace difícil la estandarización de técnicas diagnósticas e inmunoterapia, resultados que están de acuerdo con los obtenidos. Este es el primer estudio realizado en la ciudad de Cali; se espera continuar con otras investigaciones que permitan caracterizar los componentes alergénicos de especies de este hongo, el más prevalente en el ambiente de esta ciudad.
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