No abstract

Предложен простой и быстрый метод получения фенилаланил-тРНК синтетазы из пе чени кролика. Процедура состоит из трех стадий и включает в себя осаждение постмитохондриального супернатанта полиэтиленгликолем с последующими хроматографиями на анионо-(ДЭАЭ-целлюлоза) и катионо-(фосфоцеллюлоза) обменниках. Введение. Фенилаланил-тРНК синтетаза отличается от других аминоацил-тРНК синтетаз из высших эукариот целым рядом особенностей, в числе которых уникальная тетрамерная структура и большое сродст во к рибосомам [1, 2]. Необходимость поиска быстрого и надежного метода очистки этого фермента объясняется, среди прочего, доступно стью и глубокой изученностью его субстрата-фенилаланиновой тРНК. В то же время адекватного по простоте и надежности метода получе ния фенилаланил-тРНК синтетазы, несмотря на ряд попыток, предпри нятых в последнее время [3, 4], все еще не предложено. Изучение же особенностей фермент-субстратного взаимодействия, равно как и ис следование влияния фактора элонгации 1 на этот процесс, как предло жено нами ранее [5], требуют получения препаративных количеств высокоочищенного фермента. Задача настоящего исследования состояла в разработке простого и быстрого метода выделения фенилаланил-тРНК синтетазы из печени кролика. Материалы и методы. Препарат суммарной тРНК получали, как описано ранее [6]. Активность фенилаланил-тРНК синтетазы опреде ляли в реакции аминоацилирования тРНК. Реакционная смесь содер жала в объеме 50 мкл 50 мМ HEPES, рН 7,8, 100 мМ КС1, 15 мМ MgCl 2 , 3 мМ АТФ, 133 мкг суммарной тРНК из печени кролика., 55,5 мкМ Ь-[ 14 С]фенилаланин. Реакцию вели 15 мин при 37 °С и оста навливали добавлением 0,5 мл охлажденной 10 %-й трихлоруксусной кислоты.

Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины 252143, Киев, ул. Академика Заболотного, 150 80S рибосомы стимулируют первую стадию реакции аминоацилирования-стадию образования аминоациладенилат-ферментного комплекса Обсуждается возможное функциональное значение взаимодействия аминоацил-тРНК синтетаз и рибосом в клетках высших эукариот