A análise de resíduos de agrotóxicos em água é um dos requisitos da legislação de potabilidade ligadas à saúde humana. A análise de cromatografia iônica (CI) é uma alternativa técnica que vem contribuir para quantificação do herbicida glifosato e seu metabólito ácido amino metil fosfônico (AMPA) em água de consumo humano por ser rápida de preparo (filtrar e injetar), alta seletividade, boa precisão e exatidão. Esta pesquisa tem como objetivo desenvolver e validar este método para análise direta destes agrotóxicos, sem etapa de tratamento da amostra ou derivatização. Na validação proposta foram considerados os parâmetros de seletividade, exatidão e precisão, limites de detecção e quantificação, linearidade e estimativa de incerteza de medição. Os resultados obtidos indicaram que esta técnica é adequada e apresenta boa sensibilidade para a quantificação destes analitos na matriz água, sendo os resultados da validação apropriados frente aos limites máximos de concentração estipulados na Portaria 2914/11 do Ministério da Saúde.