<p>Potamotrygonidae e um grupo de raias endêmicas da América do Sul distribuídas nas principais bacias hidrográficas brasileiras, mas informações sobre suas variáveis hematológicas e bioquímicas são escassas. Este estudo teve como objetivo determinar estas variáveis em <em>Potamotrygon motoro </em>e <em>P. falkneri </em>na Bacia do Rio Paraná, Estado do Paraná e de <em>P. orbignyi </em>e <em>P. scobina </em>do Rio Piririm, na Bacia Amazônica, Estado do Amapá. Foi capturado um total de 53 espécimes de <em>Potamotrygon </em>spp. para colheita de sangue e avaliações do hemograma e variáveis bioquímicas séricas. Os valores do hemograma foram próximos para as quatro espécies e os resultados com diferenças significativas entre <em>Potamotrygon falkneri</em>, <em>P. motoro, P. orbigni </em>e <em>P. scobina </em>ocorreram quanto ao número de eritrócitos e heterófilos. Apesar da diversidade geográfica os resultados apresentaram pouca interferência dos diferentes habitats nas variáveis avaliadas. Os níveis de proteínas, globulinas, relação albumina:globulina, acido úrico, creatinina, ureia, HDL-C, relação cálcio:fósforo, sódio, cloreto, AST, ALT, creatinoquinase (CK), fosfatase alcalina, hormônios triiodotironina (T3) e tiroxina (T4) não diferiram entre as espécies de Potamotrygon. Porem, os níveis de albumina, glicose, colesterol total, triglicerídeos e gama glutamil transferase (GGT) apresentaram diferenças. Este fato sugere pouca interferência do habitat nas variáveis avaliadas apesar da diversidade geográfica de origem das raias de vida livre.</p>