O objetivo deste trabalho foi avaliar a produção de proteína microbiana, ou proteína unicelular, por cinco leveduras utilizando glicerol bruto como fonte de carbono, selecionar a cepa mais promissora e otimizar a produção de biomassa e proteína bruta por meio de delineamento composto central rotacional (DCCR). Wickerhamomyces anomalus CCC32 foi a cepa mais promissora para a produção de SCP, com produção de cerca de 20 g L?1 de biomassa e concentração de proteína bruta de 33% após 84 h fermentação, utilizando 25 g L?1 de glicerol bruto, 3,5 g/ L?1 de NaNO3 e 6,5 g L?1 de ureia, a 30 ?C e 150 rpm. O glicerol bruto mostrou-se uma excelente opção de substrato para a produção de SCP, sendo uma alternativa para agregar valor a esse resíduo. W. anomalus CCC32 apresentou características favoráveis à produção de SCP como crescimento rápido e produção de biomassa com elevado teor de proteína bruta.