Para investigar a presença do herbicida Glifosato na microbacia hidrográfica arroio Passo do Pilão foram coletadas amostras de água em 15 distintos pontos no arroio Passo do Pilão, nos períodos de 30 e 60 dias após a aplicação do herbicida (DAAH), as quais foram analisadas por cromatografia a líquido de alta eficiência (CLAE). As análises revelaram a presença do herbicida nas águas superficiais dessa microbacia, tanto nas amostras após 30 dias de aplicação do Glifosato como nas de 60 DAAH. Concentrações elevadas (acima de 100 ppb) foram detectadas, principalmente em pontos próximos às áreas de intenso cultivo. As concentrações detectadas foram menores que 500 e 700 ppb, limites de concentrações máximas permitidas para o Glifosato pela legislação brasileira e pela Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos, respectivamente. DETERMINATION OF GLYPHOSATE AND AMINOMETHYLPHOSPHONIC ACID IN SUPERFICIAL WATERS OF ARROIO PASSO DO PILÃO Abstract To investigation the presence of Glyphosate herbicide in Arroio Passo do Pilão watershed, samples of water were collected in 15 distinct points in Arroio Passo do Pilão, in period of 30 and 60 days after herbicide application (DAHA), which were analysed by high performance liquid chromatography (HPLC). The analysis revealed the presence of the herbicide in superficial areas of this watershed, even in the samples after 30 days of Glyphosate applicatication as in 60 DAHA. High concentrations (above 100 ppb) were detected, mainly in points near to intense cultivation areas. The concentrations detected were smaller than 500 and 700 ppb, limits of the maximum concentrations allowed for Glyphosate by the brazilian legislation and by the Environmental Protection Agency of United States, respectivelly.