Introducción: La aparición y rápida diseminación de Escherichia coli (E. coli) y Klebsiella pneumoniae (K. pneumoniae)resistentes a cefalosporinas de tercera generación se considera como un problema de salud pública a nivel mundial.Objetivo: determinar el perfil de susceptibilidad de E. coli y K. pneumoniae resistentes a cefalosporinas de tercera generación de cuatro instituciones de salud de la ciudad de Barranquilla, Colombia. Métodos: estudio descriptivo de corte transversal. Se tomaron registros de 1250 aislamientos (835 E. coli y 415 K. pneumoniae) productores de beta-lactamasas de espectro extendido (BLEE) por método de concentración inhibitoria mínima, reportados por las instituciones participantes. Se analizó una muestra por conveniencia de 100 cepas de E. coli y 64 de K. pneumoniae. Los aislamientos se clasificaron en perfiles de resistencia: perfiles (I – III) de E. coli y perfiles (I – IV) de K. pneumoniae, indicando resistencia a otros antibióticos beta-lactámicos y a otras familias de antibióticos.Resultados: la prevalencia de E. coli y K. pneumoniae productoras de BLEE fue 23,5% y 26,7%. Los servicios afectados fueron urgencias (32 y 12,5%), consulta externa (31 y 7,81%), hospitalizados (28 y 46,87%) y cuidados intensivos (9 y 32,81%) respectivamente. Se encontró alta sensibilidad a carbapenémicos, piperacilina-tazobactam, cefoxitin y cefepime. Alta resistencia a trimetoprim-sulfametoxazol y ciprofloxacina.Conclusiones: los perfiles fenotípicos de BLEE circulantes en los servicios hospitalarios de instituciones de Barranquilla se acompañan de multirresistencia a cefepime, trimetoprim-sulfametoxazol, ciprofloxacina y gentamicina, sin embargo, aún mantienen alta sensibilidad a los carbapenemes, piperacilina-tazobactam y amikacina.