RESUMO Objetivo: Avaliar a atividade antimicrobiana do óleo essencial de Cymbopogon citratus sobre as bactérias formadoras do biofilme dentário: Streptococcus mutans (ATCC 25175), S. salivarius (ATCC7073) e S. oralis (ATCC1055). Material e Métodos: Determinou-se a atividade antibacteriana pela Concentração Inibitória Mínima (CIM) a partir da técnica de microdiluição, de modo que, em microplacas de 96 poços foram inseridos 100ìL de caldo Brain Heart Infusion Broth duplamente concentrado, 100ìL da diluição do óleo essencial e 10 ìL do inóculo bacteriano (1,5 x 10 8 microorganismos/mL) em cada uma das microplacas. Realizou-se diluição seriada do produto partindo-se da concentração inicial de 8% até 0,0625%. A CIM correspondeu à menor diluição na qual se verificou ausência de crescimento bacteriano visível. Os testes foram realizados em triplicata e a clorexidina (2%) serviu de controle. Resultados: Verificou-se melhor desempenho do Cymbopogon citratus frente S. mutans (ATCC25175), apresentando a CIM iguais a 0,5626mg/mL, já para S. salivarius (ATCC7073) e S. oralis (ATCC1055), os resultados mostram atividade antimicrobiana semelhante (2,25mg/ml). Conclusão: O óleo essencial de Cymbopogon citratus exerce atividade antibacteriana sobre as bactérias formadoras do biofilme dentário analisadas, especialmente sobre o Streptococcus mutans (ATCC 25175).