RESUMENObjetivo. Establecer una técnica para el aislamiento de bacteriófagos a partir de aguas residuales específicos para E. coli DH5α. Materiales y métodos. Se tomó como base el método 1601 de la Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos de América y un método de obtención de enterovirus a partir de aguas residuales. En el desarrollo del protocolo se realizaron múltiples pruebas utilizando como control positivo el bacteriófago T4 y los aislamientos de bacteriófagos obtenidos a partir de aguas residuales. Resultados. Se observó la formación de unidades formadoras de placa (UFP), se obtuvó la titulación de los bacteriófagos presentes en cada uno de los cultivos de E.coli DH5α, se determinaron las relaciones que existen entre la cuantificación de la formación de unidades formadoras de placa (UFP) del tratamiento control y el tratamiento experimental y las respectivas características de las (UFP) en cada uno de los experimentos realizados. Conclusiones. Se logró establecer un protocolo microbiológico para el aislamiento de bacteriófagos específicos para E. coli DH5α. Palabras clave: Aislamiento, bacteriófagos, E. coli (Fuente: CAB). ABSTRACTObjetive. To develop an isolation technique for DH5α E. coli specific bacteriophages in wastewater. Materials and methods. The 1601 method of the Environmental Protection Agency of the UnitedStates of America and an wastewater enterovirus obtaining method were used as a reference. During the development of the protocol, multiple tests were performed using the T4 bacteriophage as positive control and the bacteriophage isolates obtained from wastewater. Results. Plaque-forming units (PFU) were observed; tittering of bacteriophages present in each of the DH5α E. coli cultures was obtained; the relationships between the quantification of PFU in the control and experimental groups, and their corresponding PFU characteristics were determined for each of the experiments. Conclusions. It was possible to establish a microbiological protocol for the isolation of bacteriophages specific for DH5α E. coli.