Penelitian ini bertujuan mengetahui miskonsepsi yang terjadi pada materi larutan penyangga menggunakan instrumen soal two-tier diagnostic test . Instrumen dikembangkan berdasarkan indikator kompetensi materi larutan penyangga menjadi 10 pertanyaan dan dinyatakan valid untuk digunakan. Penelitian dilakukan terhadap siswa dan mahasiswa tingkat I dan III berjumlah 159. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terjadi miskonsepsi pada konsep sifat larutan penyangga sebanyak 24,6%, konsep komposisi larutan penyangga sebanyak 24,1%, konsep prinsip kerja larutan penyangga sebanyak 29,3%, dan konsep pH larutan sebanyak 25,4%. Penyebab miskonsepsi dikarenakan konsep awal responden yang lemah, penjelasan guru yang sering menyederhanakan konsep, kebiasaan responden untuk menghafal, pemahaman bahasa dan konsep matematis yang lemah,  serta model pembelajaran yang belum memberikan kesempatan responden untuk memahami komponen dan prinsip kerja larutan penyangga secara mikroskopis. Pengetahuan tentang miskonsepsi diperlukan sebagai evaluasi terhadap guru dan dosen agar lebih termotivasi untuk menerapkan model pembelajaran yang mampu mengatasi miskonsepsi untuk mencegah timbulnya miskonsepsi lebih luas dalam pembelajaran kimia yang menjadikan kimia dianggap sulit. Kata kunci Miskonsepsi, Two-Tier Diagnostic Test, Larutan Penyangga