Objetivo: Avaliar o conhecimento de acadêmicos de enfermagem, antes e após a vivência de um projeto de extensão que utilizou a estratégia de multiplicadores sobre formas de transmissão, prevenção, sinais e sintomas de Infecções Sexualmente Transmissíveis (IST). Material e métodos: Estudo descritivo sobre a vivência de um projeto de extensão voltado para prevenção e promoção da saúde com enfoque nas IST, que teve como estratégia didática a transmissão de conhecimento por multiplicadores e foi desenvolvido em uma Universidade Federal pública. Resultados: Os multiplicadores apresentavam conhecimento sobre as vias de transmissão das IST, reconheciam a necessidade de tratamento do parceiro sexual e identificavam como deve ser realizado o diagnóstico de infecção pelo HIV. A participação no projeto aumentou discretamente o número de respostas corretas, assim como o conhecimento sobre as IST e os sinais e sintomas. Verificou-se maior conhecimento de IST que cursam com leucorreia/corrimento e lesões, além do HIV/Aids e necessidade de explorar mais as seguintes IST: infecção por clamídia, HPV e hepatites virais, durante o curso de graduação. Conclusão: Os multiplicadores agregaram novos conhecimentos sobre o tema e a estratégia de multiplicadores mostrou-se efetiva e deve ser estimulada como estratégia didática.Palavras-chave: doenças sexualmente transmissíveis, estudantes de enfermagem, educação em saúde.