Alat Pelindung Diri (APD) merupakan seperangkat alat keselamatan yang digunakan oleh pekerja untuk melindungi seluruh atau sebagian tubuhnya dari kemungkinan adanya pemaparan potensi bahaya lingkungan kerja terhadap kecelakaan dan penyakit akibat kerja. Petugas cleaning service mempunyai risiko untuk terkena bahan biologi berbahaya (biohazard). Kontak dengan alat medis sekali pakai (disposable equipment) seperti jarum suntik bekas maupun selang infus bekas, serta membersihkan seluruh ruangan di rumah sakit dapat meningkatkan risiko untuk terkena penyakit infeksi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui faktor yang mempengaruhi penggunaan alat pelindung diri dalam penanganan sampah medis pada petugas cleaning service di RSUD Kabupaten Bekasi Tahun 2016. Metode penelitian ini merupakan penelitian kuantitatif observasional analitik dengan menggunakan desain studi cross sectional. Sampel pada penelitian ini adalah seluruh petugas cleaning service di RSUD Kabupaten Bekasi yang berjumlah 50 orang dengan analisis bivariat menggunakan uji chisquare. Hasil penelitian menunjukkan bahwa 33 orang (66%) responden menggunakan APD dengan lengkap, hasil analisis bivariat menunjukkan hubungan penggunaan APD dengan variabel pengetahuan (p value 0.04 dan OR=9,846), sikap (p value 0,002 dan OR=7,750), umur (p value 0,352 dan OR 1,225), Pendidikan (p value 0,767 dan OR 0,498), dan masa kerja (p value 0,557 dan OR 0,656). Terdapat hubungan bermakna penggunaan APD dengan pengetahuan dan sikap dimana p value <0,05 dan tidak terdapat hubungan bermakna antara penggunaan APD dengan umur, Pendidikan dan masa kerja dimana p value >0,005.