As β-lactamases formam um grande grupo de enzimas capazes de hidrolisar o anel β-lactâmico de penicilinas, cefalosporinas e monobactâmicos, e Escherichia coli e Klebsiella spp. são as bactérias mais comumente produtoras de ESBL (β-lactamase de espectro estendido). A maior frequência de enterobactérias ESBL tem sido em amostras procedentes de pacientes hospitalizados. Objetivamos neste estudo determinar a prevalência da produção de ESBL nas amostras de Klebsiella spp. isoladas de pacientes internados em um hospital universitário, e também estabelecer o índice de isolamento por topografia destes micro-organismos. Foram analisadas 30 cepas de K. pneumoniaee 18 deK. ozaenae. O teste para investigação de ESBL foi o método de "screen" que é um método de Dupla Difusão em Disco. A ampliação do halo de inibição em alguma das cefalosporinas ou do aztreonam ou o aparecimento de uma terceira zona irregular (ghostzone) entre o disco de amoxicilina/ác. Clavulânico e o disco de uma das drogas βlactâmicas caracterizava a cepa como ESBL. Dentre as 48 amostras analisadas, 40 (83.33%) foram identificadas como ESBL, sendo 26 (86.67%) de K. pneumoniaee 14 (55.56%) K. ozaenae. Os sítios com maior taxa de isolamento de ESBL foram o SNC e SC (100% cada), seguidos do TR (85.71%), CS (83.33%), Outros (80%) e TU (62.5%). Não houve diferença significativa na análise estatística pelo Qui-quadrado entre as espécies e sítios (p > 0,05). Nenhuma amostra de K. pneumoniaefoi positiva para kpC. Palavras-chave: ESBL. Klebsiella.Prevalência.Topografia. Hospital Escola.