Uma das técnicas que vem sendo adotadas para aumentar a produtividade da cana-de-açúcar no Brasil, é o sistema de mudas pré-brotadas, cultivadas em ambientes protegidos. Busca-se que as mudas atinjam o desenvolvimento fisiológico, e, um dos parâmetros através do qual isto pode ser avaliado é o teor de clorofila. Este trabalho teve como objetivo relacionar a resposta obtida através de imagens tricromáticas e espectrais, com o teor de clorofila. As imagens obtidas de folhas previamente selecionadas, foram processadas com o uso de algoritmos computacionais e validado o método com análises de laboratório. Constatou-se que a resposta em absorbância e em comprimentos de onda específicos (470, 490 e 500 nm), atingiram correlação de 0,70 com o teor de clorofila. O resultado indica a possibilidade de implementar a modelagem multivariada com base nas respostas espectrais, em substituição aos testes destrutivos.