RESUMENEn este estudio se demuestra el uso de la transferencia nuclear de células somáticas para producir los primeros bovinos clonados en el Perú. Se obtuvieron fibroblastos de piel y células de cúmulos de donantes adultos para ser usados como carioplastos; asimismo, ovocitos obtenidos a partir de ovarios de camal fueron madurados in vitro por 24 h. Los ovocitos madurados se incubaron 2 h en demecolcina (2.5 µg/ml) para promover la formación del cono con el plato metafásico y para orientar la enucleación manual. Se eliminó la zona pelúcida en pronasa (2 mg/ml) por 3 min. La enucleación fue manual con una microcuchilla dividiendo el óvulo en dos mitades, donde las mitades carentes de núcleo fueron fusionadas por el método «sandwich» (citoplasto-fibroblasto-citoplasto) por electrofusión. Las estructuras reconstruidas se activaron químicamente mediante incubación por 5 min en 7% de etanol absoluto, seguido por 5 h de citocalacina B (5µg/ml) y cicloheximida (10 µg/ml). Las estructuras se cultivaron durante 7 d hasta la fase de incubación/eclosión de blastocisto. Siete blastocistos fueron transferidos a seis vacas receptoras sincronizadas siete días después de la ovulación. Se logró la permanencia de cuatro y tres vesículas embrionarias hasta los días 28 y 60, respectivamente. Dos terneras llegaron a nacer a partir de embriones reconstruidos con células de piel y con células de cúmulos. Mediante el análisis de genotipos, utilizando 15 marcadores (SSR) para bovinos, se confirmó que los terneros clonados fueron derivados de las líneas celulares de las donantes.Palabras clave: reproducción asistida; bovino; clonación; transferencia nuclear de cé-lulas somáticas; clonación hecha a mano

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El estado oxidativo es un factor importante que determina el desarrollo de embriones bovinos. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto del resveratrol en el porcentaje y calidad de embriones in vitro generados por separación de blastómeras en ganado bovino. Ovocitos provenientes de matadero fueron madurados y fecundados in vitro por el método convencional. Terminada las 18 horas de fecundación, los cigotos se cultivaron por 3 días en medio fluido oviductual sintético (SOF) para el control y suplementado con 2 µM y 0,5 µM para los tratamientos. Al día 3 se despojaron de su zona pelúcida (ZP) para ser cultivados a razón de cuatro blastómeras en well of thewell (WOW) por 6 días en medio SOF suplementado con resveratrol. Se evaluaron datos porcentuales de clivaje y división embrionaria (8 a 10 blastómeros) a los 3 días de cultivo superando la suplementación con 0.5µM de resveratrol (p<0,05). A los 6 días post separación de blastómeras se evaluó porcentaje de embriones, cantidad de células totales, células vivas y células muertas, utilizando la tinción Hoechst, FDA y PI respectivamente. No hubo diferencias en el porcentaje de blastocistos entre tratamientos; sin embargo, la suplementación con 0,5 µM de resveratrol al medio SOF tuvo mayor cantidad de células totales y células vivas (p<0,05). Finalmente la suplementación con resveratrol al medio SOF no aumenta el porcentaje de blastocistos pero sí mejora su calidad usando una concentración de 0,5 µM.

El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de células alimentadoras inactivadas (sistema feeder layer) provenientes de dos segmentos del oviducto bovino (istmo y ámpula) en el desarrollo in vitro de embriones bovinos. Se generaron líneas celulares de segmentos del istmo y ámpula para posteriormente ser inactivadas con mitomicina C (40 µg/ml) para inhibir su capacidad de división y eliminar la competencia por nutrientes con los embriones. Se maduraron in vitro ovocitos bovinos por 24 h y fueron fertilizados por 18 h en cultivo convencional con semen bovino Brangus. Los ovocitos supuestamente fertilizados fueron cultivados por siete días en el sistema feeder layer con células de istmo y ámpula separadamente a una concentración de 1.44 x 105 células/ml. Se obtuvo mejores resultados de producción de embriones bovinos in vitro con células ampulares (280/84; 30%) en comparación con las células del istmo (278/75; 26.9%) y el grupo control (275/73; 26.5%) realizado en un sistema convencional. Se concluye que las células del oviducto pueden cumplir funciones similares a las que cumple el oviducto en el proceso in vivo, mejorando la producción in vitro de embriones.

Se evaluaron dos pruebas de campo para determinar la Mastitis Subclinica en bovinos. Se utilizó un total de 268 vacas en producción de leche, entre 1 a 10 partos, en dos sectores San Lorenzo y Miraflores de Levanto. En un sistema extensivo, su alimentación a base de pasturas naturales y cultivadas, un solo ordeño manual, y se consideró desde la segunda semana hasta 5 meses de lactación. Se utilizó el método biológico (Prueba California - Mastitis Test) y el método químico (Prueba de Whiteside), los que permitieron comprobar cuál de las pruebas fue más eficiente para la detección de la mastitis bovina. Los resultados demostraron que el 100 % de prevalencia de mastitis subclínica, según el número de partos, se reporta que el mayor porcentaje de prevalencia se muestra en el 4 parto y según los cuartos mamarios, se reporta que el anterior y posterior derecho reporta el 30 % de prevalencia. Se evidenció un 47% de efectividad en la prueba Whitside y el 53% en la prueba California Mastitis Test. Esto dificulta la confiabilidad en criadores de ganado con ambas pruebas. Sin embargo, si se tuviera que utilizar una de las dos, sería la California Mastitis Test.