Introducción: La Enfermedad de Chagas también conocida como Tripanosomiasis americana es un problema de salud pública. Se calcula que en el mundo hay entre 6 y 7 millones de personas infectadas por Trypanosoma cruzi, la mayoría de ellas en América Latina. Objetivo: Identificar la prevalencia de infección por Trypanosoma cruzi en donantes de un banco de sangre del departamento de Boyacá 2016-2018. Materiales y métodos: Estudio descriptivo retrospectivo realizado en 25.920 donantes de sangre del departamento de Boyacá. La fuente de información fue secundaria. Se determinó la prevalencia de la infección por Trypanosoma cruzi y se compararon según sexo, grupo etario y tipo de donante a través de análisis de frecuencias. Resultados: Se evaluaron 9187 donantes durante el año 2016; 8517 en el 2017 y 8216 en el 2018, de los cuales 56,1% eran de sexo femenino y 43,9% masculino. La prevalencia de la infección por Trypanosoma cruzi fue 0,17 % en la tamización y 0,08 % con las pruebas confirmatorias de las cuales el 70,0% eran mujeres, el 85,0% donantes voluntarios por primera vez, el rango de edad en el que se presentó mayor prevalencia de este marcador serológico fue de 41 a 50 y de 51 a 65 años con un 35,0% cada uno . La prevalencia de la infección de Chagas presentó asociación estadísticamente significativa con la edad (p < 0,05). Conclusiones: Los bancos de sangre resultan ser una de las fuentes de información disponibles para monitorear el comportamiento de la enfermedad de Chagas y evaluar la toma de decisiones en salud pública, teniendo en cuenta  que  la enfermedad  se caracteriza de manera asintomática y sin compromiso clínico en la mayoría de los casos.