Com o objetivo de avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Trolox e Glutationa reduzida (GSH) na viabilidade in vitro de espermatozoides criopreservados de cães, amostras de sêmen foram colhidas de animais das raças Buldogue Francês (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), por meio de manipulação digital. A seguir, procedeu-se à avaliação macroscópica e microscópica e divisão do volume de sêmen em alíquotas, de acordo com os experimentos e grupos experimentais, utilizando-se diferentes concentrações de Trolox (200 e 300 M/L) ou GSH (2 e 5 M/L). As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina de congelação e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 o C (60 seg) e incubação durante 60 minutos, constatou-se que os resultados de motilidade, vigor e espermatozoides com acrossomas íntegros evidenciaram diferença significativa (P<0,05) apenas entre os tempos de incubação, nos três experimentos. No Exp. 2, a adição de 2 e 5 M/L de GSH (G2 e G3) determinou maior (P<0,05) porcentual de células sem estresse oxidativo. Concluiu-se que GSH, nas concentrações de 2 e 5 M/L, pode ser adicionada ao diluente de criopreservação do sêmen de cães.