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Changes in the mono-and divalentcation-stimulated ATPase activities of myosin progressively labeled with7V-ethyl-[2,3-14 C 2 ]-maleimide were used to classify the readily reacting thiol groups into 3 types. The results show that one thiol-1 and one thiol-2 group are associated with each of the 2 active sites of myosin. Concentrations of KC1 higher than 0.4M and/or temperatures above 10 °C lead to exposure of a variable number of thiol groups of a third class not affecting the enzymic properties. Although modification of thiol groups itself results in changes in structure and function of the protein, the patterns of incorporation of./V-ethyl-[ 14 C 2 ]-maleimide under various conditions of temperature, ionic strength and ligands bound to the protein revealed 9 different conformations of intact myosin. These were distinguished on the basis of the relative reactivity of the 3 different classes of thiol groups. The sequence of blockage of thiol groups reveals that cooperativity between the 2 active sites is induced by binding of a magnesium nucleotide complex to the protein. In the conformation of the long-lived myosin-product intermediate occuring during hydrolysis of Mg-ATP at 25 °C, 4 thiol groups of the third class react as well as or even more readily than those of the first and second classes. Konformationsunterschiede in Myosin, IV. Radioaktive Markierung spezifischer SH-Gruppen unter dem Einfluß von Liganden-BindungenZusammenfassung: Einbau von7V-Äthyl-[2,3-14 C 2 ]maleinimid und die dadurch bewirkten Veränderungen der mit einwertigen und zweiwertigen Kationen stimulierten ATPase-Aktivitäten erlauben, die leicht reagierenden SH-Gruppen von Myosin in 3 Klassen einzuteilen. Jedem der beiden aktiven Zentren des Myosins kann eine SH-1 und eine SH-2 Gruppe zugeordnet werden. Hohe Salzkonzentrationen (> 0.4M KC1) und/oder Temperaturen über 10 °C bewirken, daß SH-Gruppen der 3. Klasse, die die Enzymeigenschaften des Myosins nicht beeinflussen, leicht mit dem Alkylierungsmittel reagieren. Auch wenn allein durch eine Modifizierung der SH-Gruppen schon Struktur und Funktion des Eiweißes beeinflußt werden, erlaubt das Einbaumuster des radioaktiven JV-Äthylmaleinimids je nach den Bedingungen (lonenstärke, Temperatur, ans Eiweiß gebundene Liganden) neun verschiedene Konformationen des nativen Myosins zu unterscheiden, und zwar aufgrund der relativen Aktivität der drei Arten von SH-Gruppen. Wenn ein Mg-Nucleotid-Kom-

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