Cryptococcus neoformans é uma levedura encapsulada encontrada no ambiente, responsável por causar meningoencefalite em pacientes com o sistema imune comprometido. No Brasil, a criptococose é a segunda causa de morte por micoses sistêmicas. A eficácia limitada dos fármacos antifúngicos usados no tratamento desta doença tem estimulado a busca por terapias alternativas como, por exemplo, o uso de plantas medicinais. Thymus vulgaris, popularmente conhecida como tomilho, é uma planta aromática cujo óleo essencial (OE) possui propriedades antifúngicas. Este estudo teve como objetivo avaliar a ação do OE de T. vulgaris em isolados clínicos de C. neoformans. Este óleo, analisado por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa (CG/EM), revelou como seus principais compostos: timol, ρ-cimeno e linalool. Testes de microdiluição em caldo mostraram a eficácia deste OE contra os isolados fúngicos, com concentrações inibitórias mínimas (CIMs) variando de 32 a 128μg/mL. Testes de interação in vitro ─ OE de T. vulgaris e fluconazol (FCZ) ─ demonstraram não haver potencialização da atividade antifúngica desse fármaco. Avaliou-se também seu efeito no metabolismo celular fúngico e os resultados mostraram alterações na atividade enzimática mitocondrial apenas em concentrações >1.024μg/mL. Os resultados da ação deste OE em eritrócitos humanos indicaram que ele possui baixa atividade citotóxica em valores de MIC. Ao descrever a ação antifúngica de T. vulgaris, esta pesquisa mostra seu potencial como alternativa para o tratamento contra C. neoformans.