Objetivou-se, com este trabalho, avaliar o controle da meloidoginose e o crescimento da cana-de-açúcar, em função da aplicação de Bacillus subtilis ao solo após multiplicação em vinhaça. Bioensaios foram conduzidos em laboratório com avaliação do crescimento de B. subtilis em meio líquido com interesse na melhor composição de meio de cultura, a partir da vinhaça. No experimento em casa de vegetação foi utilizado solo coletado em área de cultivo de cana com histórico de alta infestação com Meloidogyne spp. No solo acondicionado em vasos efetuou-se o plantio da variedade de cana-de-açúcar RB 72454, cujos tratamentos foram: controle; vinhaça pura (50 m³ ha-1); Bacillus subtilis em suspensão aquosa (50 m³ ha-1); B. subtilis multiplicado na vinhaça para 50 m³ ha-1 e 100 m³ ha-1. A multiplicação de Bacillus subtilis em meio de cultura à base de vinhaça (25%) foi significativamente superior em comparação com o meio de cultura caldo nutriente. A aplicação de B. subtilis em suspensão aquosa promoveu o crescimento e a redução da reprodução dos nematóides em cana-de-açúcar durante o experimento. A aplicação de B. subtilis multiplicado na vinhaça não proporcionou os benefícios de estímulo ao crescimento e controle da meloidoginose na cana-de-açúcar, encontrados com a aplicação apenas da bactéria no solo.