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Neste trabalho estudou-se a produção de ácido lático em reator batelada utilizando como substrato soro de leite suplementado com diferentes concentrações de extrato de levedura Saccharomyces cerevisiae (EL), por ação de cultura mista de Lactobacillus acidophilus LA-5®, Bifidobacterium BB-12® e Streptococcus thermophilus imobilizada em esferas de alginato de cálcio, em diferentes temperaturas. Foram estudados dois fatores, concentração (CONC) e temperatura (TPR), sendo adotado os níveis de 0%, 6,5% e 13% para o fator concentração de extrato de levedura e 30°C, 34°C e 38°C para o fator temperatura. Observou-se que células imobilizadas não tiveram a taxa de produção de ácido lático afetada pelo aumento da temperatura de fermentação. Por outro lado, o aumento na concentração de suplementação do meio por EL levou ao aumento da produção de ácido lático. Foi avaliada também a viabilidade das esferas de alginato de cálcio quando reutilizadas para inocular novo meio de cultura. Após cinco ciclos de reutilização as esferas não apresentaram rachaduras e modificação no diâmetro médio. A concentração de ácido aumentou cerca de 157% entre o primeiro e o último ciclo de fermentação.