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One of the critical points in the cryopreservation process is the use of a proper diluent while lowering the temperature following the resuspension and thawing processes. Here, we tested an alternative diluent for the process of freezing boar semen. We used skimmed dried milk (SDM) during the cooling and post-thawed resuspension steps. To do so, we collected semen from 15 Dalland boars using the glovedhand technique, and incubated each ejaculate sample at 30 °C. We then removed two semen aliquots from a pre-dilution. We diluted one of the aliquots in Beltsville thawing solution (BTS -control), and the remaining sample was diluted in SDM. Both aliquots were subsequently held at 30º C for 45 min (1 st period of stabilization). At the end of this period, we analysed vigor and motility to determine sperm metabolic activity. We then held the diluted semen at 25° C for 30 min (2 nd period of stabilization) and at 17° C for 2 h (3 rd period stabilization). We centrifuged the semen at 800 × g and 1600 × g at 5º C for 15 min, discarded the supernatant, and resuspended the sperm pellet in 2 mL of the cooling diluent at 5° C for 1h. We again diluted the samples in 2 mL of the freezing diluent, poured them into straws, and cooled and plunged them into liquid N 2 . The sêmen samples were thawed in a 39º C water bath, and were resuspended in their respective diluents at the same temperature. We determined the following sperm features: vigor, motility, vitality, acrosomal integrity and membrane functionality. During the first phase of temperature cooling (30º C), semen diluted in SDM exhibited a higher vigor (3.4 ± 0.6) and motility (78.6 ± 13.0) than those diluted BTS (vigor: 3.1 ± 0.7; motility: 69.4±14.3). However, after the thawing procedure, the inverse was observed in that: BTS samples exhibited a higher vigor (2.1 ± 0.6) and motility (35.5 ± 21.0) than SDM samples (vigor: 1.7 ± 0.9; motility: 22.8 ± 18.1). Regarding membrane functionality and acrosomal integrity, we did not find a significant difference between BTS and SDM, although SDM provided a higher percentage of living cells at the end of the freeze/thaw procedures (72.3 ± 16.4). In summary, we suggest that BTS should be considered a better option than SDM for the cooling and post-thaw resuspension steps of boar semen freezing process. ResumoEsse estudo objetivou testar um diluente alternativo, a base de leite em pó desnatado, durante as etapas de resfriamento e ressuspensão pós descongelação durante a congelação do sêmen suíno. Para isso o sêmen de 15 varrões da raça Dalland, foi coletado através da técnica da mão enluvada. Visando o início da curva de congelação, cada ejaculado foi incubado a 30 °C. Em seguida, foram retiradas duas alíquotas de sêmen para uma pré-diluição. Uma das alíquotas foi diluída no diluente Beltsville Thawing Solution (BTS -Controle) e a outra em leite em pó desnatado (LPD), onde permaneceram a essa temperatura por 45 minutos. O sêmen pré-diluído passou por três tempos de estabilização. Ao final do primeiro tempo (30 °C -45 minut...

A betaína é um constituinte do plasma seminal humano, cuja baixa concentração tem sido relacionada à infertilidade, entretanto não há relatos sobre seus efeitos no sêmen suíno. O presente estudo teve como objetivo verificar os efeitos da adição de diferentes concentrações de betaína sobre espermatozoides suínos diluídos e conservados em leite em pó desnatado a 10°C por quatro dias. Foram analisados 56 ejaculados submetidos a quatro tratamentos: 1. Leite em pó desnatado (LPD); 2. LPD+1g betaína/100mL; 3. LPD+2g betaína/100mL e 4. LPD+3g betaína/100mL. Foram realizadas análises diárias (D0-D4) de vigor e motilidade e no D0 e D4 foi realizado o teste hiposmótico e esfregaço para avaliar a vitalidade e integridade acrossomal. Os resultados de vigor, motilidade e vitalidade espermática diferiram entre os tratamentos, sendo superior no T1(p<0,05). que também manteve o maior percentual de células com membrana íntegra em D0 e em D4, porém, neste último não diferiu (P>0,05) de T4. A betaína não exerceu efeito protetor sobre a célula espermática suína diluída e conservada em meio à base de LPD a 10°C. A adição de concentrações iguais ou acima de 1g de betaína no diluente influenciaram negativamente a qualidade do sêmen, portanto, não são aplicáveis na conservação do sêmen suíno resfriado a10°C em LPD.

ResumoA criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103 ® ) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 o C por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution -BTS (controle) ou em ACP-103 ® , e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103 ® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática. Palavras-chave: Sêmen suíno; diluente alternative; congelação; viabilidade espermática. AbstractSemen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP ® -103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate

ResumoMuitas tentativas são feitas para se melhorar a conservação do sêmen suíno, sendo a gema de ovo conhecida por suas propriedades crioprotetoras. Este trabalho teve por objetivo testar diferentes concentrações de gema de ovo em pó (GOP), adicionada ao diluente água de coco em pó (ACP-103 ® ), e verificar qual mantém melhor a viabilidade espermática. Foram diluídos 36 ejaculados em ACP-103 ® , acrescidos de diferentes concentrações de GOP (0%, 1%, 3%, 5% e 7%) e conservados a 17 °C. Diariamente, foram realizadas análises de vigor e motilidade e nos dias 1 (D0), 3 (D2) e 5 (D4) de conservação foram feitas as de vitalidade, morfologia e resistência osmótica. Utilizou-se o teste estatístico de Kruskal-Wallis e de Dunn's para dados não paramétricos e ANOVA e Tukey para os paramétricos. Queda de vigor e motilidade foi observada em todos os tratamentos. Os GOP-3%, GOP-5% e GOP-7% foram os que melhor mantiveram o vigor espermático em D0 (2,4±0,8; 2,5±1,1 e 2,8±0,9, respectivamente), sem diferenças significativas entre si. O mesmo ocorreu para a motilidade (77±15%, 74±23% e 81±16% em D0). Os resultados das análises de vitalidade, morfologia e resistência osmótica não diferiram. Em conclusão, as concentrações entre 5 e 7% de GOP adicionado ao ACP-103 ® permitem sua utilização como diluente eficiente para manter a qualidade espermática. Palavras-chave: água de coco em pó; conservação; gema de ovo; sêmen suíno. AbstractMany attempts have been made to improve the conservation of boar semen. Egg yolk is known to have cryoprotectant properties. This study aimed to test different concentrations of egg yolk added to the coconut milk powder extender (ACP-103 ® ), and verify which one is better to maintain sperm viability. The ejaculated (36) were diluted in ACP-103 ® supplemented with different concentrations of egg yolk (0%, 1%, 3%, 5% and 7%). The conservation occurred at 17 °C, and vigor and motility analysis were carried out daily. On days 1 (D0), 3 (D2) and 5 (D4) the semen was evaluated for