O uso de enzimas no processamento de alimentos, detergente e no setor têxtil está em constante ascensão. A aplicação de enzimas proteolíticas de origem microbiana se destaca no setor industrial devido as condições desejáveis para uso em processos biotecnológicos, são biocatalisadores naturais e não tóxicos. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar a produção e caracterizar as proteases sintetizadas por Aspergillus flavus. A cultura matriz foi preparada em ágar Sabouraud e mantida por sete dias a 25 ºC. Em seguida, a espécie foi cultivada em meio líquido [GYP (glicose, extrato de levedura e peptona)].  A fermentação foi conduzida em agitador orbital 150 rpm, 25 ºC. Após oito dias a massa micelial foi separada por filtração a vácuo em papel Whatman nº 1 e o extrato bruto recuperado, e filtrado em membrana polietersulfônica de 0,45μL. Para determinação da atividade das proteases foi utilizado como substrato azocaseína 1% (p/v) em tampão Tris-HCl pH 7.2.  Os resultados mostraram que A. flavus excretou proteases em todos nos meios testados, porém com atividade significativa no meio GYP (90,13 U/mL). As proteases apresentaram atividade ótima em pH 5 e temperatura 50ºC.  Esses resultados sugerem que essas enzimas podem ser utilizadas em diversos segmentos industriais, como alimentícia, têxtil e panificação.