Introducción. La infección por Toxoplasma gondii puede presentarse en los humanos con un amplio rango de manifestaciones que van desde el estado asintomático hasta la enfermedad grave, según el estado inmunológico del individuo. Los mecanismos de transmisión incluyen la transfusión sanguínea, pero poco se sabe sobre la frecuencia del parásito en los bancos de sangre de Colombia.Objetivo. Determinar la prevalencia de la infección con T. gondii en donantes de un banco de sangre de Cúcuta mediante técnicas de diagnóstico serológico y molecular.Materiales y métodos. Se determinaron los anticuerpos IgG e IgM contra T. gondii mediante un inmunoensayo en suero en 348 donantes. Se determinó la frecuencia de ADN de T. gondii utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en sangre total de donantes seropositivos y se analizaron las variables de interés con base en la información obtenida durante la selección de donantes.Resultados. De los 348 donantes participantes, 134 (38,5 %) presentaron anticuerpos IgG contra T. gondii; dos (0,6 %) de ellos presentaron tanto IgG como IgM y, en dos (1,5 %), se detectó ADN del parásito en la sangre. Un análisis bivariado evidenció una asociación entre la seropositividad para T. gondii y tener más de 26 años de edad (p=0,020).Conclusiones. La prevalencia de la infección con T. gondii encontrada en los donantes de sangre sugiere una exposición significativa al agente, la cual adquiere relevancia al detectarse la parasitemia.