A comparison of preservation methods for Trichoderma harzianum cultures

Stocco, Marina Celeste; Mónaco, Cecilia Inés; Cordo, Cristina Alicia

doi:10.1016/j.riam.2010.06.001

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“…Kapang ini memiliki karakteristik khas koloni berupa adanya pola pertumbuhan radial hijau tua dan hijau muda (Gambar 1). Stocco et al (2010) (Sadek, 2002). Evaluasi kemampuan T. asperellum MT02 dalam menginhibisi pertumbuhan bakteri ESBL E. coli (Gambar 2).…”

Section: Hasil Dan Pembahasanunclassified

Karakterisasi Senyawa Bioaktif Kapang Laut Trichoderma asperellum MT02 dengan Aktivitas Anti-Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) E. coli

et al. 2019

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The Trichoderma asperellum MT02 has been reported to has antibacterial activity against the Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) E. coli based on the screening results through an agar plug method. This study aimed to evaluate the antibacterial activity of T. asperellum MT02 and characterize the composition of the bioactive compounds group possessed in its crude extract. The isolate was cultured in the Malt Extract Broth (MEB) media (static, 27 oC, 15 days). The intracellular metabolites from mycelium were extracted using methanol while extracellular metabolites from broth media were extracted using ethyl acetate. The antibacterial activity of crude extracts was tested using the paper disc diffusion method while bioactive compounds were characterized using the phytochemical method. The results showed that the antibacterial activity of the broth media extract performed a greater activity than the crude extract from the mycelium. The crude extract from mycelia only contained flavonoid and phenol hydroquinone compounds while the crude extract from broth media contains alkaloids, flavonoids, phenols hydroquinone and saponins. Kapang Trichoderma asperellum MT02 telah dilaporkan memiliki potensi sebagai penghasil senyawa antibakteri melawan Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) E. coli berdasarkan hasil penapisan melalui metode agar plug. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak kasar kapang T. asperellum MT02 serta komposisi golongan senyawa bioaktif yang dimiliki. Kapang dikultur pada media Malt Extract Broth (MEB) (statis, 27 oC, 15 hari) di mana metabolit intraseluler dari miselium diekstrak menggunakan metanol sedangkan metabolit ekstraseluler dari media kaldu diekstrak menggunakan etil asetat. Aktivitas antibakteri ekstrak kasar diuji menggunakan metode difusi kertas cakram sedangkan senyawa bioaktif dikarakterisasi menggunakan metode fitokimia. Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri asal ekstrak media kaldu lebih baik dibandingkan ekstrak kasar asal miselium kapang. Ekstrak kasar kapang asal miselia hanya mengandung senyawa golongan flavonoid dan fenol hidrokuinon sedangkan ekstrak kasar asal media kaldu mengandung alkaloid, flavonoid, fenol hidroquinon dan saponin.

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Section: Hasil Dan Pembahasanunclassified

Karakterisasi Senyawa Bioaktif Kapang Laut Trichoderma asperellum MT02 dengan Aktivitas Anti-Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) E. coli

et al. 2019

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“…Thirty strains were obtained from each locality. Trichoderma isolates were storaged on cellulose filter paper following Stocco et al (2010) technique.…”

Section: Isolation Of Trichoderma Strainsmentioning

confidence: 99%

Aislamientos nativos de Trichoderma harzianum inducen resistencia a Zymoseptoria tritici en plantas de trigo.

Stocco

Mansilla

Mónaco

et al. 2015

Bol. Soc. Argent. Bot.

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Aislamientos nativos de Trichoderma harzianum inducen resistencia a Zymoseptoria tritici en plantas de trigo. La Septoriosis del trigo es endémica en las regiones productoras de Argentina, impactando en su rendimiento. Una alternativa de manejo, es el uso de agentes de biocontrol. Se propuso: determinar la efectividad de los aislamientos de Trichoderma obtenidos a partir de suelos de diferentes localidades de la región triguera argentina, sobre el control de la enfermedad y caracterizar la actividad de la serín proteasa (con capacidad antifúngica) del fluido intercelular de trigo generada por los mejores aislamientos. Para determinar la capacidad biocontroladora de los 90 aislamientos de Trichoderma, se sembraron semillas recubiertas con cada uno de los antagonistas y posteriormente las plántulas se inocularon con Zymoseptoria tritici. Se evaluó la capacidad de cada aislamiento del biocontrolador para restringir el progreso de la septoriosis 21 días después de la inoculación. A las plantas tratadas con las 10 mejores cepas de T. harzianum, se les midió el incremento de la actividad proteolítica. Cuatro de los aislamientos (2 y 8, de Los Hornos y 129 y 141 de Manfredi) disminuyeron el porcentaje de cobertura picnidial y se destacaron por el aumento de la actividad proteolítica en un cultivar susceptible. Éste comportamiento se asocia a un mecanismo bioquímico de defensa con un efecto sistémico temprano.

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“…Para determinar la técnica de conservación más eficiente, se realizaron evaluaciones a los 3, 6, 12, 18 y 24 meses de iniciado el experimento. Los resultados de las evaluaciones demostraron que todas las cepas se recuperaron con un óptimo crecimiento en vaselina, glicerol, agua destilada estéril y papel de filtro (Stocco et al, 2010 1,2,4,5,7,8,10,12,13,14,15,18,24,26,29 Bragado 33,34,42,46,50,54,56,57,58,59,60 Bordenave 62,63,66,67,68,69,71,72,73,74,76,77,78,79,80,81,83,87,89,90 Paraná 92,93,95,97,98,102,103,107,108,113,…”

Section: Técnicas De Conservación De Las Cepasunclassified

“…Cada cepa, que se encuentra conservada con la técnica del papel de filtro (Stocco et al, 2010), se recuperaron sobre APG 2% con antibiótico, en cajas de Petri.…”

Section: Acondicionamiento De Las Cepasunclassified

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Control biológico de <i>Mycosphaerella graminicola</i>, patógeno del trigo, con cepas de <i>Trichoderma harzianum</i> caracterizadas por su morfología, fisiología, actividad enzimática y molecular

Stocco¹

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Frente a las consecuencias indeseables del control químico, la demanda pública de alimentos más sanos y el cambio actual de los paradigmas productivos, la tendencia es sustituir total o parcialmente los fungicidas sintéticos por métodos alternativos no contaminantes, en el marco del Manejo Integrado. El trigo es el cereal de mayor distribución geográfica en el mundo y su demanda irá en aumento debido al incremento de la población mundial. La región triguera en la Argentina abarca una zona muy amplia con condiciones favorables para la aparición de diversas enfermedades. Una de ellas, de origen fúngico, es la Septoriosis ó Mancha de la hoja del trigo (Septoria tritici Roberge in Desmaz. anamorfo; Mycosphaerella graminicola (Fuckel) J. Schroeter, in Cohn teleomorfo). A nivel mundial, ocasiona daños que oscilan entre 31 y 54% de reducción en el rendimiento y en Argentina entre 17 y 50% dependiendo del estado fenológico en el que ocurre la infección. El método utilizado tradicionalmente para el control de la enfermedad es la aplicación de productos químicos sintéticos. El uso masivo de estos productos favoreció la aparición de patógenos resistentes además de las graves consecuencias la contaminación del ambiente. Utilizando microorganismos antagonista, el control biológico, ha tomado relevancia en estos últimos años. Las especies del género Trichoderma son los antagonistas más utilizados para el control de enfermedades de plantas, producidas por hongos, debido a su ubicuidad, a su facilidad para ser aisladas y cultivadas, a su crecimiento rápido en un gran número de sustratos y a que no atacan a plantas superiores. Estas especies basan sus propiedades antagónicas en la activación de mecanismos muy diversos. Uno de ellos es que pueden ejercer el biocontrol de hongos fitopatógenos indirectamente, compitiendo por el espacio y los nutrientes, modificando las condiciones ambientales, estimulando el crecimiento de las plantas y sus mecanismos de defensa. Otra medida, es mediante el micoparasitismo, por la penetración directa de las hifas al hospedador y/o por producción de enzimas extracelulares. El objetivo de este trabajo es presentar un estudio integrado, que combine propiedades: morfológicas, fisiológicas y moleculares de los aislamientos nativos de T. harzianum, para ser utilizarlos como eficientes agentes de control biológico. En este estudio se evaluaron 240 aislamientos de Trichoderma obtenidas de muestras de suelo de diferentes localidades de la región triguera argentina. La capacidad antagónica se ensayó en plántulas de trigo, en invernaculo. Para seleccionar las cepas de Trichoderma harzianum se tuvo en cuenta la capacidad de reducir en un 50 % tanto la superficie necrosada como la cobertura picnidial generada por M. graminicola. Se obtuvieron de esta manera 37 cepas del antagonista. Los resultados presentados hasta el momento evidencian la importancia de resistencia sistémica inducida (RSI) actuando en la defensa de la planta contra M.graminicola. Para la identificación de los aislamientos de Trichoderma se utilizó la técnica de PCR con los cebadores forward THITS-F2 y reverse THITS-R3 los cuales permiten identificar específicamente a T. harzianum. Para la caracterización genética intraespecífica se utilizaron marcadores ISSR. Con los resultados obtenidos se agruparon las cepas, en tres grupos de similitud. Estos grupos no presentaron correspondencia con el origen geográfico, ni con el año de aislamiento y ni con los distintos niveles de antagonismos. Los resultados de la caracterización morfocultural, el crecimiento radial y el color de las colonias, la coloración del medio de cultivo y el tamaño y la forma de los conidios no presentaron diferencias con las descripta en la taxonomía clásica para la especie T. harzianum. La presencia de las clamidosporas y su ubicación en el micelio, fue la característica que demostró mayor variación en el presente estudio. El 27% de las 37 cepas estudiadas no formaron clamidosporas durante el tiempo de duración del ensayo. De aquellas cepas que si las formaron, el 59% se ubicaron de manera intercalar y el 26% tanto terminales como intercalares. Sólo el 15% de las cepas formaron clamidosporas terminales. Los aislamientos se caracterizaron fisiológicamente en base a los siguientes parámetros: crecimiento de las colonias en diferentes fuentes carbonadas y nitrogenadas, crecimiento de las mismas bajo condiciones extremas de temperatura y pH. Los resultados presentaron escasa variabilidad por sí solos y no generaron una discriminación entre las cepas. La caracterización de la actividad enzimática destacó a dos cepas (2 y 8) como capaces de producir altos niveles de β-1-3 glucanasa, quitinasa y proteasa. Es importante resaltar en este estudio la relación encontrada entre las cepas cuando se integraron los atributos morfológicos, fisiológicos y moleculares. Con esta combinación se pudo observar una clara correspondencia entre ellas y su origen geográfico. Como ejemplo de ello, las cepas que integran el grupo I se encuentran divididas en dos ramas bien diferenciadas. Así las cepa 1, 5, 8 y 12 pertenecen a la localidad de Los Hornos y las cepas 160, 162, 165, 170 y 177 a la de Lobería. Con los resultados obtenidos en este trabajo se reconocieron una serie de propiedades (morfológicas, fisiológicas y moleculares) que sumadas a la identificación tradicional de T. harzianum, servirán para ampliar la caracterización de las cepas de esta especie como agentes de biocontrol y seguir su evolución en el tiempo y en medio ambiente cuando éstas se apliquen con fines biotecnológicos.

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A comparison of preservation methods for Trichoderma harzianum cultures

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Karakterisasi Senyawa Bioaktif Kapang Laut Trichoderma asperellum MT02 dengan Aktivitas Anti-Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) E. coli

Karakterisasi Senyawa Bioaktif Kapang Laut Trichoderma asperellum MT02 dengan Aktivitas Anti-Extended Spectrum β-Lactamase (ESBL) E. coli

Aislamientos nativos de Trichoderma harzianum inducen resistencia a Zymoseptoria tritici en plantas de trigo.

Control biológico de <i>Mycosphaerella graminicola</i>, patógeno del trigo, con cepas de <i>Trichoderma harzianum</i> caracterizadas por su morfología, fisiología, actividad enzimática y molecular

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