Análise funcional dos genes Xist e DNMT1 na manutenção do processo de inativação do cromossomo X humano através do silenciamento gênico por RNAi

Abstract

AGRADECIMENTOSAgradeço à Dra. Lygia pela oportunidade de ter aprendido tanto dentro de seu laboratório. Sua orientação cheia de energia e entusiasmo sempre foi contagiante na comemoração de bons resultados e revigorante nas dificuldades. Seu comprometimento também com a divulgação da ciência é impressionante. Sem dúvida será sempre um querido exemplo a ser seguido. Obrigada! Agradeço a todos que tanto contribuíram para a minha aprendizagem, sem os quais teria sido, se não impossível, ao menos muito mais difícil. Agradeço especialmente à Dra. Marina Soukoian, pela paciência e dedicação inesgotáveis ao compartilhar seus imensos conhecimentos, mesmo com os alunos mais inexperientes como eu era. Agradeço também à Dra. Luciana Vasques, por ter me ensinado toda a base do que sei da prática da biologia molecular, por ter me introduzido no mundo da inativação do X, e pelas discussões acadêmicas que temos até hoje.Agradeço aos amigos queridos do laboratório, passados e presentes, por tornaram o dia-a-dia sempre mais divertido, além, é claro, de sempre contribuírem com idéias e a "mão na massa" sem hesitação. Obrigada a todos! Agradeço particularmente à Ana Maria, Joana e Luciana, por tanto compartilharmos e por terem se tornado grandes amigas nesse nosso caminho. Obrigada meus amores! Agradeço às Dras Ângela Morgante e Regina Mingroni, pelas quais sinto profunda admiração, e aos seus estimados alunos por compartilharem seus laboratórios, suas sempre boas idéias e suas horas descontraídas de almoço. Agradeço especialmente às queridas Rafa, Lilian, Fátima e Mara por oferecerem ajuda e carinho sempre que esses eram necessários. Agradeço à minha família querida por ser a minha família, especialmente Vó, Vô, Véio, Véia, Rê, Pedrinho e Estela, que torcem tanto por mim.Agradeço ao Nil, meu amorzinho, por seu carinho, sua ajuda e por sempre me dar força nesses anos todos.Aos meus pais e à Feca, agradeço por seu carinho e apoio incondicionais e por sempre acreditarem em mim. Vocês são meus motivos de orgulho pelas pessoas que são e à vocês dedico essa tese. Fico feliz por deixar vocês felizes.

Estabilidade do controle epigenético em células humanas normais e transformadas

“…Nosso grupo tem utilizado fibroblastos primários humanos imortalizados com hTERT (subunidade catalítica da telomerase humana) como modelo para o estudo da manutenção da ICX (Vasques, 2003;Stabellini, 2008;Stabellini, De Mello et al, 2009). Por outro lado, células transformadas, como a linhagem HCT116, são de mais fácil manipulação genética, incluindo transgênese e recombinação homóloga.…”

“…A verificação da expressão gênica foi realizada através de RT-PCR (do inglês reverse transcription polymerase chain reaction). Para a linhagem GM135-Tel os dados de genotipagem e expressão para genes ligados ao cromossomo X haviam sido obtidos anteriormente (Stabellini, 2008).…”

“…20) Figura 20: FISH de RNA utilizando sonda contra XIST. Em A, células femininas GM135-Tel (Stabellini, 2008). Em B, células masculinas HCT116 após tratamento com 10µM de 5-aza-dC por 96 horas.…”

“…(Csankovszki, Nagy et al, 2001). Em nosso laboratório, observamos que células GM135-Tel com 68% de queda na expressão de DNMT1 apresentam desmetilação no promotor de XIST não acompanhada de mudanças na expressão deste gene (Stabellini, 2008), sugerindo a ação de outros fatores no controle da expressão de XIST em células humanas normais.…”

Estudo do padrão de inativação do cromossomo X em tecido extra-embrionário humano

“…Durante o trabalho de doutorado da aluna Raquel Stabellini foi gerado um perfil de atividade gênica alelo-específica de 9 dos 23 genes escolhidos para o presente estudo (Stabellini, 2008 Em conjunto, a análise dos três diferentes fragmentos desses espécimes corrobora a hipótese de mosaicismo na placenta a termo. Migeon et al, 2005).…”