AVALIAÇÃO DA VIABILIDADE CELULAR E PRODUÇÃO DE POLI(3-HIDROXIBUTIRATO) DE Cupriavidus necator APÓS LIOFILIZAÇÃO UTILIZANDO LEITE DESNATADO COMO CRIOPROTETOR

Abstract

RESUMO -A preservação de micro-organismos por diferentes metodologias de secagem tem sido utilizada há décadas. Essas metodologias garantem o armazenamento de culturas por longos períodos de tempo, mantendo suas características fisiológicas. A liofilização é o método preferido para transporte e armazenamento de vastas coleções de cultura de micro-organismos. Este trabalho relata o crescimento e produção de P(3HB) por C. necator após a bactéria ser submetida à liofilização, utilizando leite desnatado como protetor. A cepa foi cultivada em meio mineral, incubada a 150 rpm/35 °C por 42 h, em seguida, 1 mL do caldo foi misturado a 1 mL de leite, acondicionado em tubos de vidro e liofilizados. A viabilidade celular foi determinada com plaqueamento e contagem (expressa em UFC/mL) antes e após (0, 14, 21 e 80 dias) o processo de liofilização. Para efeito comparativo do crescimento de C. necator e produção de P(3HB) após a liofilização, dois cultivos em frascos foram realizados a partir de uma cepa liofilizada (120 dias após o processo de liofilização) e outra armazenada em glicerol a -80 ºC (considerado o armazenamento "controle"), apresentando  máx de 0,16 h -1 e 0,15 h -1 , respectivamente. Observou-se um decréscimo na contagem total da cepa liofilizada em função do tempo de armazenamento de 5,2x10 8 UFC/mL logo após o processo de liofilização (sem armazenamento), para 2,4x10 6 após 80 dias. Porém este decréscimo na viabilidade celular não influenciou no crescimento de C. necator e a bactéria se mostrou capaz de sintetizar o polímero.