ABSTRACT. Current study evaluates ethanol and levan production using Zymomonas mobilis immobilized on alginate and chitosan beads and assesses the capacity of the beads for reuse in sequential fermentations. Two experiments were carried out: In the first experiment 2 design evaluated the following independent variables: sucrose concentration; pH; incubation time; temperature and agitation. In the second experiment, based on the best conditions observed in 2 , the capacity of the immobilization support reuse in subsequent fermentations was evaluated for 12 days. In experiments using fractionated factorial experimental design 2 ). In batch sequential fermentation, re-using immobilization support, alginate support was efficient by maintaining the cellular viability on immobilized support (0.94 g L -1), levan production (21.11 g L -1) and ethanol production (87.21 g L -1). Chitosan support was inadequate for sequential batches since the beads dissolved after the second cycle.Keywords: biofuel, microbial polysaccharide, entrapment, fractionated factorial experiment.Produção de etanol e levana por batelada sequencial utilizando Zymomonas mobilis imobilizadas em esferas de alginato e quitosana RESUMO. O objetivo deste estudo foi avaliar a produção de etanol e levana por Zymomonas mobilis imobilizadas em esferas de alginato e quitosana e avaliar a capacidade de reutilização das esferas em fermentações sequenciais. Dois experimentos foram realizados: no primeiro, 2 foram avaliadas as variáveis independentes: concentração de sacarose; pH; tempo de incubação; temperatura e agitação. O segundo experimento foi realizado com base nas condições ótimas do ensaio 2 , onde foi avaliada a capacidade de reutilização dos suportes durante 12 dias. Para o experimento 2 , o suporte mais eficiente para a imobilização foi o alginato, com 2,6 g L ). A quitosana não foi adequada para a fermentação sequencial, uma vez que as esferas desintegraram-se após o segundo ciclo de reutilização do suporte.Palavras-chave: biocombustível, polissacarídeo microbiano, aprisionamento, planejamento fatorial fracionado.