Caracterização dos mecanismos de ação da proteína CspC na manutenção da viabilidade e na resposta de <i>Caulobacter crescentus</i> a estresses.

Abstract

CARACTERIZAÇÃO DOS MECANISMOS DE AÇÃO DA PROTEÍNA CspC NA MANUTENÇÃO DA VIABILIDADE E NA RESPOSTA DE Caulobacter crescentus A ESTRESSES RESUMO SANTOS, J. S. Caracterização dos mecanismos de ação da proteína CspC na manutenção da viabilidade e na resposta de Caulobacter crescentus a estresses. 2016. 114 f. Tese (Doutorado em Microbiologia) -Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016.Caulobacter crescentus, uma α-proteobacteria não patogênica, possui em seu genoma quatro genes codificando Proteínas de Choque Frio (CSPs): cspA, cspB, cspC e cspD. CspC e CspD são expressas apenas em fase estacionária, e ambas apresentam dois domínios CSD. Para determinar se ocorre sobreposição funcional das CSPs, o mutante cspC foi complementado com genes codificando: variantes dos domínios de CspC; mutações pontuais nos domínios de CspC; e CspD. As mutações pontuais nos dois domínios proporcionam fenótipos mais severos que a falta de cspC. Nenhuma CSP de C. crescentus é capaz de complementar o fenótipo de sensibilidade ao frio de E. coli BX04. Entretanto, os domínios de choque frio de CspC de C. crescentus individualmente são capazes de complementar este fenótipo. Uma análise transcricional global mostrou que a ausência de cspC afeta a transcrição de 11 genes na fase exponencial e 60 genes na fase estacionária. A meia vida dos genes sciP, aceA e CC0682 se mostrou menor no mutante cspC, sugerindo que é possível que CspC desempenhe uma regulação pós-transcricional. Palavras-chave: Microbiologia. Biologia molecular. Regulação gênica. Resposta estresse em bactérias. Proteínas de choque frio. Caulobacter crescentus. ABSTRACT SANTOS, J. S. Characterization of the mechanisms of CspC action in Caulobacter crescentus cell viability and stress response. 2016. 114 p. Ph. D. thesis (Microbiology) -Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016.8C. crescentus, a non-pathogenic α-proteobacteria, has in its genome four genes encoding cold shock proteins (CSPs): cspA, cspB, cspC e cspD. CspC and CspD have two CSDs and are induced during stationary phase. In order to determine whether there is a functional overlap among the CSPs, the cspC mutant strain was complemented with genes encoding: different domain composition of CspC; point mutations within the CspC cold shock domain; and CspD. Point mutations in the CspC CSDs caused a more severe phenotype than that of the null strain. None of the C. crescentus CSPs complemented the cold sensitivity of E. coli BX04 mutant. However, the individual CSDs of C. crescentus CspC complemented this phenotype. A microarray global transcriptional profiling showed the absence of cspC affected the transcription of 11 genes at exponential phase and 60 genes at stationary phase. mRNA decay experiments showed that the sciP, aceA e CC0682 mRNAs were less stable in the cspC mutant, indicating that its effect could be at least partially due to posttranscriptional regulation. INTRODUÇÃO E REVISÃO DE LITERATURA Caulobacter crescentusAs alfa-proteobactérias repres...