Caracterização funcional e estrutural de uma metaloprotease hemorrágica isolada da peçonha de 'Bothrops jararacussu'.

Abstract

pela co-orientação. Mostrou-me com paciência, dedicação, amizade e ética que a ciência pouco significaria se não fosse transmitida. Aos professores do departamento de Bioquímica da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto, pela contribuição na minha formação profissional, durante a participação no Programa de Aperfeiçoamento de Ensino "PAE", com atividade docente supervisionada. Aos professores do Centro de Química de Proteínas (Prof. Dr. Lewis Joel Greene e Prof. Dr. José César Rosa) e Pós-graduandos (Helen Julie e Vítor Faça) pela disponibilidade do laboratório e contribuição científica para determinar a composição em aminoácidos e a seqüência N-terminal da enzima. Aos colegas de laboratório Fábio Kiss Ticli, Carolina Daláqua Sant´Ana, Silvana Marcusi, os quais nos meus incansáveis dias de trabalho estiveram presentes. Aos técnicos do Laboratório de Toxicologia da FCFRP, Adélia e João Franco pelo auxílio técnico-científico, os quais foram fundamentais para realização desse trabalho. Aos técnicos e funcionários do laboratório de Bioquímica da FCFRP-USP pela disponibilidade científica e de infra-estrutura para realização de alguns experimentos. À Universidade Federal do Rio de Janeiro, pela realização dos testes de inibição da agregação plaquetária. Ao Instituto Codomiro Picado da Costa Rica, pela realização dos ensaios imunoenzimáticos. À todos os autores de livros e manuscritos de circulação nacional e/ou internacional, pela contribuição relevante no desenvolvimento desse trabalho. Aos funcionários da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto que de alguma forma contribuíram. Ao CNPq e à FAPESP pelo auxílio financeiro. Lista de Abreviaturas e Siglas aa: aminoácido AcN: acetonitrila AMBIC: bicarbonato de amônio ATCC 29648: Linhagem celular de Escherichia coli ATCC 25923: Linhagem celular de Staphyloccocus aureus ATZ: aminoacilanilinotiazolinona BJ: Bothrops jararacussu BjussuMP-I: primeira metaloprotease de Bothrops jararacussu BSA: albumina de soro bovina BthA-I-PLA 2 : fosfolipase isolada do veneno de Bothrops jararacussu BthTX-I: bothropstoxina I C18: resina cromatográfica contendo 18 átomos de carbonos ligados à matriz CK: creatina-cinase CLAE: cromatografia líquida de alta eficiência CQP: centro de química de proteínas DHM: dose hemorrágica mínima DTT: ditiotreitol EDTA: ácido etilenodiaminotetraacético EGTA: ácido etilenoglicol bis (β-aminoetil-éter)-N,N,N',N'-tetraacético MP: metaloprotease NaAc: acetato de sódio PAGE: eletroforese em gel de poliacrilamida PBS: solução salina tamponada em fosfato PITC: fenilisotiocianato PLA 2 : fosfolipase pmoL: picomol PMSF: fluoreto de fenilmetilsulfonil PRP: plasma rico em plaquetas PTC: feniltiocianato PTH: aminoacilfeniltio-hidantoína PVDF: fluoreto de polivinilideno RGD: seqüência de aa arginina-glicina-ácido aspártico SD: desvio padrão SDS: dodecil sulfato de sódio SDS-PAGE: eletroforese em gel de poliacrilamida em condições desnaturantes SP: serinoprotease TCA: ácido tricloroacético TEA: trietilamina TFA: ácido trifluoracético Tris: tris ...