The fungal cell wall viewed through the electron microscope appears transparent when fixed by the conventional osmium tetroxide method. However, ruthenium tetroxide post-fixing has revealed new details in the ultrastructure of Penicillium sp. hyphae and Saccharomyces cerevisiae yeast. Most significant was the demonstration of two or three opaque diverse electron dense layers on the cell wall of each species. Two additional features were detected. Penicillium septa presented a three-layered appearance and budding S. cerevisiae yeast cell walls showed inner filiform cell wall protrusions into the cytoplasm. The combined use of osmium tetroxide and ruthenium tetroxide is recommended for post-fixing in electron microscopy studies of fungi.Key words: fungal cell wall, fungal ultrastructure, osmium tetroxide, ruthenium tetroxide, Penicillium sp., Saccharomyces cerevisiae.Efecto comparativo del tetróxido de osmio y del tetróxido de rutenio como fijadores sobre la ultraestructura de la pared celular de hongos Al microscopio electrónico, la pared celular de los hongos es de apariencia translúcida en especímenes procesados mediante la posfijación convencional con tetróxido de osmio. La posfijación con tetróxido de rutenio reveló nuevos detalles ultraestructurales en hifas de Penicillium sp. y en levaduras de Saccharomyces cerevisiae. El aspecto más destacado fue la modificación en la transparencia de la pared celular, característica de la fijación con tetróxido de osmio. El tetróxido de rutenio permite verla como una estructura compuesta por dos o tres capas oscuras de diferente tonalidad. Se observaron también otros dos rasgos importantes: los septos en las hifas de Penicillium sp. presentaban una apariencia trilaminar y en la pared celular de las levaduras de S. cerevisiae, en etapa de gemación, se destacaban unas prolongaciones filiformes que emergían desde la capa interna y se proyectaban hacia el citoplasma. Se recomienda el uso combinado de los dos fijadores en estudios ultraestructurales de los hongos.Palabras clave: pared celular, ultraestructura de los hongos, tetróxido de osmio, tetróxido de rutenio, Penicillium sp., Saccharomyces cerevisiae.