Charakterisierung eines CaCl₂‐abhängigen Transfektionssystems von Escherichia coli und Lambda‐Phagen‐DNS

Abstract

Die E. co2i K12-Stamme C 600 und Y me1 wurden nach CaC1,-Behandlung mit Lambda-Phagen-DNS transfiziert. Untersucht wurde die Abhangigkeit der Transfektionseffektivitat von der CaC1,-Konzentration, der Wachstumsphase und der Aufbewahrung der Rezipienten bei 0-4 "C. Fur beide Rezipienten wurde eine optimale CaCI,-Konzentration von 0,2 M ermittelt. Beide Stamme zeigten einen Anstieg der Transfektionseffektivitaten bzw. eine gleichhohe Kompetenz bis 15-30 Std. nach Praparation der Rezipienten. IVahrend die Y mel-Bakterien aus der friihen logarithmischen Wachstumsphase (2 x lo8 Bakterien/ml) die hochste Kompetenz aufwiesen, erhielten wir maximale Transfektionseffektivitaten mit C 600-Rezipientm aus der mittleren bis spiiten log-Phase.Das Transfektionssystem besitzt ein breites pH-Optimum zwischen 5,O-6,O. Natrium-Acetat-Puffer (20 mix) erwies sich am geeignetsten.Eine zu starke Erhohung der NaCl-Konzentration im Transfektionsansatz fiihrt zur Hemmung der DNS-Aufnahme.Die Transfizierbarkeit der untersuchten Stamme ist unter jeweils optimalen Bedingungen gleich gut, reproduzierbar und liegt zwischen 1-2 x lo4 PFU/pg DNS (ca. 1 x P F U pro Molekiil Lambda-DNS.

Factors which influence CaCl2 dependent transfection of Lambda DNA in Escherichia coli K12 recipients

“…Therefore, we tested the influence of several parameters on the transfection efficiency without genetic variation of the recipient strains and of the bacteriophage DNA. In an earlier paper (ANDREE and LIEBSCHER 1978) we reported on the influence of the growth phase of the bacterial culture, the pH range and the dependence of the efficiency of transfection on the time of storage.…”