ComparaÇão de nested-PCR com o diagnóstico direto na detecÇão de Ehrlichia canis e Anaplasma platys em cães

Abstract

ResumoOs sinais clínicos das infecções por Ehrlichia canis e Anaplasma platys são similares, e o diagnóstico desses patógenos feito por esfregaços sanguíneos corados é difícil devido à sensibilidade e especificidade. Por outro lado, os diagnósticos moleculares são altamente sensíveis e específicos, e nested-PCRs têm sido otimizadas para o diagnóstico preciso desses patógenos em cães. Em um Hospital Veterinário Escola, amostras de sangue total com EDTA foram obtidas de 100 cães, e esfregaços foram feitos das amostras de sangue para busca dos parasitos intracelulares. Para cada amostra, DNA foi extraído e submetido à nPCR para detecção de E. canis e A. platys. Os resultados dos esfregaços sanguíneos mostraram que 9% dos animais foram positivos para E. canis e 21% para A. platys. Com relação à nPCR, 57 e 55% dos cães foram positivos para E. canis e A. platys, respectivamente. Quando comparados com a nPCR, os esfregaços sanguíneos corados revelaram resultados falso-negativos para E. canis e A. platys. Os resultados indicam que a nPCR é altamente sensível e específica para detecção de ambos os patógenos, e os diagnósticos moleculares podem ser mais úteis nos Hospitais Veterinários.Palavras-chave: nPCR, cães, Ehrlichia, Anaplasma. AbstractThe clinical signs of Ehrlichia canis and Anaplasma platys infection are similar, and the diagnosis of these pathogens made by stained blood smears is poor due sensibility and specificity. On the other hand, the molecular diagnosis is highly sensitive and specific and nested-PCR have been optimized for accurate diagnosis these pathogens in dogs. At the veterinary teaching hospital, whole-blood samples with EDTA were obtained from 100 dogs and smears were made from blood samples for evaluation for intracellular parasites. For each sample, DNA was extracted and submitted to nPCR analysis for detection of E. canis and A. platys. The results of stained blood smears showed 9% of the animals were positive for E. canis and 21% for A. platys. Regarding of nPCR analysis, 57 and 55% of dogs were positive for E. canis and A. platys respectively. As compared to a nested PCR, the stained blood smears revealed false-negative results for both E. canis and A. platys. The results indicate that the nPCR is highly sensitive and specific for detection of both pathogens and the molecular diagnosis could be more useful at veterinary hospital.

Occurrence of Ehrlichia canis and Anaplasma platys in household dogs from northern Parana

“…The occurrence (5.47%) of coinfections in dogs caused by A. platys and E. canis reinforces the hypothesis that these infections are probably transmitted by the same vector; similar results were observed in different geographical regions in Brazil (DANTAS-TORRES, 2008;DAGNONE et al, 2009;RAMOS et al, 2009;SANTOS et al, 2009). This phenomenon was also described in dogs from Thailand (SUKSAWAT et al, 2001b), Venezuela (SUKSAWAT et al, 2001a;HUANG et al, 2005), and Grenada (YABSLEY et al, 2008).…”

“…When the result (19.4%) of A. platys was compared with similar studies, it was possible to observe that the prevalence level derived from this study was lower than that described in Campo Grande, State of Mato Grosso do Sul, 42% (DAGNONE et al, 2009), and Recife, State of Pernanbuco, 55% (RAMOS et al, 2009). However, these results were higher than those observed in Rio de Janeiro, State of Rio de Janeiro, 15.84% (FERREIRA et al, 2007), Jaboticabal, State of Sao Paulo, 8% (DAGNONE et al, 2009), and Ribeirao Preto, State of Sao Paulo, 14.9% (SANTOS et al, 2009).…”

Investigação molecular de Ehrlichia spp. e Anaplasma platys em felinos domésticos: alterações clínicas, hematológicas e bioquímicas

“…Aguirre et al (2008) relatam após comparar cinco protocolos diferentes de nPCR com uma PCR convencional, que a nPCR chega a ser 33% mais eϐiciente para a detecção de E. canis. Ramos et al (2009) também recomenda o nPCR para pesquisa de E. canis e A. platys pela maior sensibilidade e especiϐicidade para detecção de ambos os patógenos. Entretanto, uma análise comparativa entre a PCR (gene DSB) e a nested-PCR (16S rRNA), realizada em 24 amostras sangüíneas de cães naturalmente infectados por E. canis, demonstrou que as duas técnicas são adequadas ao diagnóstico da erliquiose monocítica canina (Machado 2004).…”

“…D' Agnone (2006) observou a presença de E. canis em plaquetas de dois cães por meio da nPCR. Sousa (2006) também observou mórulas de E. canis em plaquetas de dois cães e de E. canis e A. platys em outros dois cães de um total de 15 animais pesquisados por nPCR e Ramos et al (2009) através da nPCR observaram que de quatro cães com mórulas em plaquetas, três eram E. canis e apenas uma amostra era A. platys. Neste estudo nenhuma das amostras positivas no esfregaço foram positivas para nenhuma espécie do gênero Ehrlichia sp, sendo necessário maiores investigações acerca da presença das inclusões nas plaquetas.…”

“…A ϐim de encontrar as mórulas, uma análise cuidadosa e ampla do esfregaço sanguíneo deve ser realizada na microscopia optica. Infecções por E. canis tambem podem apresentar corpos de inclusão em algumas células do sangue, incluindo as plaquetas (Almosny 1998, D' Agnone 2006, Ramos et al 2009), em algum estágio, e a possibilidade de visualização dos grâ-nulos devido à ativação plaquetária não pode ser descartada. Essas inclusões podem ser erroneamente identiϐicada como uma mórula de A. platys.…”