Comparación De Dos Técnicas De Concentración Viral a Partir De Aguas Crudas Del Departamento Norte De Santander

Abstract

ResumenLos métodos de detección de virus entéricos a nivel de laboratorio presentan cierto nivel de complejidad, debido a que estos entes se encuentran muy diluidos en aguas. Esto genera la necesidad de encontrar métodos eficientes que permitan concentrarlos de forma rápida, selectiva, sensible, eliminando interferencias presentes en la matriz y con la certeza de tener partículas virales infecciosas. En este estudio se comparó la ultrafiltración tangencial (UFT) y la separación inmunomagnética (IMS) como técnicas de concentración viral, empleando Rotavirus como modelo. El grado de eficiencia de las mismas fue confirmado empleando la reacción en cadena de la polimerasa acoplada a una reversotranscriptasa (RT-PCR) la cual facilitó la identificación de Rotavirus a partir de aguas crudas en cuatro plantas de potabilización del departamento Norte de Santander, incluyendo sus fuentes de abastecimiento. La UFT se llevó a cabo en un equipo dotado entre otros componentes de membranas millipore de 0.8, 0.45 and 0.22 µm. Para la IMS se emplearon micropartículas de 2.0 µm funcionalizadas con anticuerpos monoclonales anti-Rotavirus.Los resultados permitieron determinar que tanto la IMS como la UFT concentraron eficientemente Rotavirus a partir de agua crudas. No obstante, la IMS exhibió mayor sensibilidad a la hora de comparar la cantidad de RNA viral extraído a partir de cada muestra analizada.Además, está técnica sólo requirió 2 horas para obtener el concentrado viral en comparación de 24 horas empleadas por la UFT. Por tanto, se recomienda emplear para la concentración de virus patógenos presentes en aguas crudas la técnica de separación inmunomagnética. Usualmente, los virus se encuentran muy diluidos en agua (1 a 10 3 partículas virales/Lt de agua) [2,5,6], creando la necesidad de pretratamientos de la muestra para poder concentrar las partículas virales. Existen diferentes técnicas de concentración entre las cuales se encuentra la ultrafiltración tangencial (UFT).Esta técnica consiste en realizar una serie de filtrados en membranas millipore de distinto tamaño, dirigiendo la muestra a un filtro de flujo tangencial por medio de una bomba peristáltica de alta presión, produciendo dos fracciones, la filtrada de interés y la excluida por el filtro [7]. Posteriormente, se realiza una segunda ultrafiltración, de donde se obtiene el filtrado final que es analizado a través de técnicas de biología molecular para realizar la respectiva detección del patógeno [8].No obstante, esta técnica requiere el uso de métodos adicionales a los moleculares para poder determinar el grado de infectividad de las partículas virales concentradas.Otra técnica de concentración viral es la separación inmunomagnética (IMS), la cual emplea partículas magnéticas acopladas a anticuerpos capaces de detectar, concentrar y separar patógenos. La afinidad existente entre el antígeno y el anticuerpo, los cuales se unen a través de interacciones supramoleculares mediado principalmente por puentes de hidrógenos, uniones iónicas y fuerzas de van der Waals [9] h...