Introdução: O câncer é uma das principais causas de morte e é considerado uma das doenças que mais cresce no Brasil. Estima-se que cerca de 600 mil novos casos de câncer sejam diagnosticados entre 2018 e 2019. Objetivo: Construir e validar o instrumento "Questionário de conhecimentos da doença para pacientes com câncer", avaliar o nível de conhecimento de pacientes com câncer sobre sua doença e relacionar o nível de conhecimento com a idade, sexo, renda familiar e escolaridade. Método: O instrumento foi construído com base na literatura específica do câncer. Os itens foram apresentados a uma equipe multidisciplinar da área da saúde para julgamento quanto à clareza e ao conteúdo do instrumento. Em seguida, gerou-se a versão-piloto e, após as análises, o instrumento foi aplicado em 71 pacientes com câncer do Centro de Pesquisas Oncológicas (Cepon). A reprodutibilidade foi obtida por meio do coeficiente de correlação intraclasse do método de teste e reteste. Resultados: A versão final do instrumento obteve 14 questões e apresentou um índice de clareza de 8,63±0,75. O valor do coeficiente de correlação intraclasse foi de 0,858 e do alfa de Cronbach, 0,611. A análise fatorial revelou cinco fatores, e os escores finais foram comparados com as características dos pacientes, sendo a baixa escolaridade e a baixa renda relacionadas a baixos escores de conhecimento. Conclusão: O instrumento possui índice de clareza satisfatório e de validade adequado, podendo ser utilizado para avaliar o conhecimento de pacientes com câncer sobre sua própria doença.