Diazepam e nordiazepam em plasma: métodos de extração líquido-líquido e em fase sólida no pré-tratamento de amostras para análise cromatográfica em fase líquida

Abstract

Recebido em 16/4/04; aceito em 10/1/05; publicado na web em 13/4/05 DIAZEPAM AND NORDIAZEPAM IN PLASMA: LIQUID-LIQUID AND SOLID PHASE EXTRACTION IN SAMPLE PRE-TREATMENT FOR HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY ANALYSIS. Analysis of diazepam (DZP) and its active metabolite nordiazepam (NDZP) in plasma is commonly performed in clinical medicine to ensure proper therapeutic effects while minimizing the incidence of toxicity. This study aimed to optimize analytical parameters and compare two pre-treatment techniques, liquid-liquid (LLE) and solid phase extraction (SPE), as well as liquid chromatographic conditions to analyze simultaneously DZP and NDZP in plasma from 20 patients treated with a daily dose of 10 mg. Both techniques showed to be well in line with the international criteria for analytical validation, which permitted to quantify DZP (66.2 -1148.6 ng mL INTRODUÇÃOO diazepam (DZP), assim como os demais benzodiazepínicos, possui propriedades hipnótica, tranqüilizante, antidepressiva, sedativa e relaxante muscular 1 . É um fármaco largamente utilizado para aliviar tensão, ansiedade, espasmos musculares e controlar estados epilépticos 2 . Esse fármaco é biotransformado principalmente ao nível hepático por enzimas do sistema microssômico do citocromo P450, CYP2C e CYP3A, sendo três os metabólitos biologicamente ativos: nordiazepam (NDZP), temazepam e oxazepam 3,4 . A determinação de fármacos em fluidos biológicos deve ser realizada para atender às necessidades clínicas e toxicológicas, sendo de grande importância no diagnóstico de intoxicações acidentais ou intencionais, em toxicologia forense para esclarecimento da causa mortis e na monitorização de pacientes em uso prolongado do medicamento 5,6 . O estabelecimento do melhor regime terapêutico e estudos farmacocinéticos só podem ser realizados se métodos de análise adequados 7-9 estiverem disponíveis. Os níveis plasmáticos de diazepam, assim como seu metabólito nordiazepam, são encontrados em concentrações da ordem de ng mL -1 , o que requer métodos com baixos limites de quantificação 10 . Ainda não está estabelecido um intervalo terapêutico para este fármaco que possa ser utilizado para a maioria dos pacientes. Entretanto, valores entre 300 e 400 ng mL -1 de plasma foram relatados por Baldessarini 7 , para o uso do DZP como ansiolítico. Hillestad et al. 8 observaram níveis superiores a 400 ng mL -1 , em pacientes que ingeriam doses diárias de 10 mg do fármaco.Vários processos analíticos têm sido desenvolvidos para a quantificação de benzodiazepínicos em matrizes biológicas. Os métodos mais comuns são a cromatografia gasosa (CG) 11 com detector de captura de elétrons e a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector de UV 12 . Esse último método apresenta a vantagem de não necessitar de prévia volatilização ou derivatização do analito [12][13][14][15] . Qualquer que seja a técnica de identificação, as amostras biológicas precisam passar por pré-tratamentos que visam a remoção de interferentes da matriz e a extração e concentração dos ...

Boron‐Doped Diamond Electrode Coupled to Liquid Chromatography: Application to Simultaneous Determination of Benzodiazepines

“…The approach used to decide which compound to use for this purpose was a satisfactory electrochemical response; flunitrazepam was chosen as internal standard. This compound was previously used in a study conducted by Freire et al [26], when diazepam and nordiazepam were determined in plasma by a HPLC-UV method.…”

“…The accuracy was evaluated through analyses of pharmaceutical formulations, by the proposed HPLC-BDD method and by an HPLC-DAD method, a ;previously described procedure [26], with some modifications. For HPLC-DAD the chromatographic separation was achieved using a Waters XTerra RP18 analytical column (250 Â 4.6 mm, 5 mm), the mobile phase employed was sodium phosphate (pH 3.5; 0.10 mol L À1 )-acetonitrile (65 : 35, v/v), isocratic elution with a flow rate of 1.2 mL min À1 and detection was performed at 228 nm.…”

Diazepam influences urinary bioindicator of occupational toluene exposure

“…DZP and NOR concentrations were determined as previously described (Freire et al, 2005). Aliquots of 500 L rat plasma were added to 10 L of the IS (100 g/mL nitrazepam) and 2 mL of sodium hydrogen phosphate pH 9.0, then extracted with 5 mL nhexane: ethanol (90:10, vol/vol) for 3 min in a vortex mixer.…”