Objetivo: analisar o conhecimento dos enfermeiros que atuam nas unidades básicas de saúde, acerca da Política Nacional de Saúde Integral de Lésbicas, Gays, Bissexuais, Travestis e Transexuais. Método: pesquisa qualitativa e quantitativa, realizada na Região de Saúde Sudoeste do Distrito Federal, com aplicação de questionários a 47 enfermeiros. Resultados: os enfermeiros mostraram-se desfavoráveis a atos discriminatórios, todavia, apontam opiniões contraditórias no que tange aos princípios e diretrizes da Política em questão. Conclusão: a visão restrita acerca da complexidade da atenção a minorias sexuais e de gênero pode comprometer a atenção à saúde equitativa.