Recebido em 3/6/03; aceito em 18/11/03; publicado na web em 27/05/04 ANALYSIS OF NON-ESTERIFIED FATTY ACIDS IN HUMAN PLASMA BY CAPILLARY GAS-CHROMATOGRAPHY WITH SPLITLESS INJECTION. The aim of the present work was to test the combination of non-esterified fatty acid (NEFA) isolation using fumed silicon dioxide with capillary gas-chromatography (C-GC) with splitless injection for the analysis of NEFAs in human plasma. Injection volume, solvent re-condensation and split purge flow-rate were the parameters evaluated for the analysis of fatty acid methyl esters by C-GC. The use of a solvent re-condensation technique, associated with 1.0 µL injection and a split purge flow rate of 80 mL/min resulted in satisfactory analysis of NEFAs. Fourteen fatty acids were identified in plasma samples, ranging from 2.03 to 184.0 µmol/L. The combination of both techniques proved useful for routine analyses of plasma NEFAs.Keywords: non-esterified fatty acids; capillary gas-chromatography with splitless injection; fumed silicon dioxide.
INTRODUÇÃOOs ácidos graxos desempenham importantes funções na fisiologia humana, tais como de substrato energético e na estrutura de membranas celulares 1 . Quando mobilizados do tecido adiposo, os ácidos graxos são transportados no plasma sanguíneo sob a forma não esterificada (ácidos graxos não-esterificados, AGNE), associados à albumina plasmática. Durante o jejum, o tecido adiposo sofre maior mobilização e os AGNE passam a ser o principal substrato energético para o organismo. Sua concentração plasmática total varia de 300 a 2000 µmol/L, no período alimentado e no jejum, respectivamente 1 . Para a determinação da composição dos AGNE é necessário primeiramente separá-los das demais classes de lipídios plasmáticos (triacilgliceróis, fosfolipídios, ésteres de colesterol, dentre outras). O método clássico usado para a separação das diferentes classes de lipídios é a cromatografia em camada delgada que, entretanto, apresenta algumas desvantagens, como elevado tempo de análise e potencial risco de oxidação dos ácidos graxos poli-insaturados 2 . Outros métodos de separação ou isolamento dos AGNE incluem a cromatografia em coluna 3 e a separação em cartuchos de extração em fase sólida 4 . Entretanto, o preparo das colunas é trabalhoso e a reprodutibilidade dos resultados é dependente da habilidade no seu preparo. Já os cartuchos de extração em fase sólida disponíveis comercialmente apresentam custo relativamente elevado para análises de rotina. No método descrito por Polette et al.
5, os AGNE são separados das demais classes de lipídios plasmáticos pelo uso do dióxido de silício fundido ("fumed silicon dioxide", DSF) como agente delipidante. Após agitação do plasma com o DSF, forma-se um gel denso no qual as lipoproteínas são aprisionadas, enquanto os AGNE associados à albumina plasmática permanecem em solução na fase aquosa, que é facilmente separada por centrifugação. Este método, além de ser relativamente rápido e de baixo custo, melhora a recuperação dos analitos, quando comparado à cromatografia em ...