Objetivo: verificar os fatores de estresse comumente vivenciados por estudantes do curso de Enfermagem na realização de atividades teóricas e práticas da formação acadêmica. Método: estudo descritivo, transversal, desenvolvido com 142 discentes do curso de Enfermagem de uma universidade pública localizada em Mato Grosso do Sul, Brasil. Os dados foram coletados em fevereiro de 2020 por meio de questionário sociodemográfico/acadêmico e da escala de Avaliação de Estresse em Estudantes de Enfermagem e, posteriormente, analisados de maneira descritiva, segundo a moda e percentis superiores e inferiores à moda das variáveis. Resultados: medo de cometer erros durante a assistência ao paciente (57,4%), sentimento de ter adquirido pouco conhecimento para fazer provas práticas (52,1%), insegurança ou medo de fazer provas teóricas (44,7%) e obrigatoriedade de realizar trabalhos extraclasse (41,5%) foram fatores que provocaram níveis muito altos de estresse entre os estudantes. Conclusão: os resultados podem auxiliar faculdades de Enfermagem no planejamento e fortalecimento de intervenções preventivas com foco no gerenciamento do estresse e seu enfrentamento.