Los aceites esenciales (AE) de las hojas de Mangifera indica L. recolectadas en los estados Mérida (M), Barinas (B) y Portuguesa (P), Venezuela, fueron obtenidos por el método de hidrodestilación, utilizando la trampa de Clevenger, obteniéndose 0,1 mL (0,0025%), 1,4 mL (0,035%) y 1,0 mL (0,025%), respectivamente. Los AE se caracterizaron por el método de cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas (CG/EM), se identificaron 30 compuestos en la muestra recolectada en M, 24 en B y 14 en P, siendo los mayoritarios en M: β-selineno (22,56%), α-gurjuneno (14,66%), β-cariofileno (10,40%), en B: β-cariofileno (36,32%), α-humuleno (22,71%), α-gurjuneno (21,43%) y en P: β-cariofileno (36,07%), α-gurjuneno (22,55%) y α-humuleno (21,24%). Debido al rendimiento, solo se determinó la actividad antibacteriana en los AE de B y P, por el método de difusión en agar con discos, frente a bacterias de referencia internacional (Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 23357 y Pseudomonas aureginosa ATCC 27853). Ambos AE inhibieron el desarrollo de S. aureus y E. faecalis con una concentración inhibitoria mínima de 200 µL/mL y 300 µL/mL, respectivamente. Este es el primer estudio comparativo y actividad antibacteriana del aceite esencial obtenido de las hojas de M. indica L. de tres regiones de Venezuela.