Exequibilidade do DDRT-PCR para análise da expressão gênica diferencial em células de medula óssea murina

Abstract

Modelo do estudo: Estudo Experimental. Introdução: Atualmente a pesquisa com células-tronco temgerado grande interesse devido a sua aplicabilidade no campo na medicina regenerativa. A medulaóssea é considerada a maior fonte de células-tronco adultas e o estabelecimento de novos métodospara a análise da expressão gênica torna-se estritamente necessário. Desse modo, o "DifferentialDisplay Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (DDRT-PCR)", pode ser uma ferramentaacessível para a investigação de pequenas diferenças no nível de expressão gênica em diferentes tiposcelulares, sob distintas condições.Objetivo: Neste presente trabalho nós investigamos a exequibilidade do DDRT-PCR na identificação dediferenças no nível de expressão gênica global em células da medula óssea de camundongos sobduas condições. Métodos: Primeiramente, a medula óssea foi isolada frescamente e uma secundaparte foi cultivada por uma semana sem troca de meio. Posteriormente, as células da medula (fresca ecultivada) foram submetidas a análise da expressão gênica, seguindo a metodologia de DDRT-PCR.Resultados: Inicialmente, foi possível identificar em células da medula óssea com uma semana decultivo, pequenas alterações morfológicas (células ovais para fibroblastóides) e no perfil de proteínas,por meio da visualização de bandas em SDS-Page gel. Finalmente, a análise da expressão gênica porDDRT-PCR, mostrou uma expressão diferencial com a presença de três bandas (1300, 1000 and 225pb) exclusivamente expressas na medula óssea fresca e mais duas bandas (400 and 300 pb) presentes somente nas células de medula cultivadas.Conclusões: Em suma, a metodologia de DDRT-PCR mostrou-se eficiente para a identificação depequenas diferenças no nível de expressão gênica em células da medula óssea sob duas definidascondições. Portanto, nós acreditamos que o DDRT-PCR possa ser designado de forma rápida e eficiente para a análise diferencial de expressão gênica em diferentes tipos de células-tronco, sob diferentescondições.